產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Alkaline Phosphatase，中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除，常用于阻止載體的自連作用：在分

子克隆實(shí)驗(yàn)中，DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在，載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無磷酸基團(tuán)，因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板。

本品為蝦來源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。該酶作用于末端去磷酸化，無論末端為粘端，還是平端。SAP也可以用來降解PCR反應(yīng)中的dNTP，用于后續(xù)測(cè)序和SNP分析。

 

產(chǎn)品組分

 

組分編號(hào)	組分名稱	10322ES72
10322-A	Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL)	250 U
10322-B	10×SAP buffer	1 mL

 

產(chǎn)品性質(zhì)

 

來源（Source）	來自畢赤酵母，克隆有北極蝦（Pandalus rorealis）的蝦堿性磷酸酶基因
質(zhì)量控制（Quality Control）	無核糖核酸酶、脫氧核糖核酸酶污染
純度（Purity）	＞95%
熱滅活（Thermal Inactivation）	65℃溫浴5 min，活性完全不可逆喪失
活性定義（Unit definition）	在25℃條件下，30分鐘能使1 μg經(jīng)HindⅢ(產(chǎn)生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位為1個(gè)活力單位。

 

儲(chǔ)存條件

 

-25~-15℃保存，有效期3年。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0)，1 mM MgCl₂，0.1 mM ZnCl₂，25℃溫育。
2. 熱失活：65℃加熱5分鐘，不可逆失活。當(dāng)完成去磷酸化反應(yīng)后，無需純化產(chǎn)物，可以直接用于后續(xù)連接反應(yīng)。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
4. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用說明

 

DNA去磷酸化

1. 在EP管中加入下列試劑*：

組分	體積（μL）
DNA片段**	1 pmol
10×SAP buffer	2 µL
Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/µL)	1 µL
無菌 ddH2O	Up to 20 µL

*可根據(jù)比例相應(yīng)放大反應(yīng)體系。

**1 pmol DNA 片段量約相當(dāng)于1 μg 3 kb大小的質(zhì)粒。

2. 混勻上述試劑，于25℃孵育30 min。

3. 將EP管65℃，5 min溫浴，終止反應(yīng)。

 

相關(guān)產(chǎn)品

 

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格
Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)小牛腸堿性磷酸酶	10321ES80	1000 U

 

 

Ver.CN20250219