小鼠模型是結(jié)腸炎造模常見(jiàn)模型，自從1985年首次采用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium, DSS)制備出倉(cāng)鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型后，已有大量數(shù)據(jù)證明DSS結(jié)腸炎模型的病因、臨床癥狀、病理改變及治療應(yīng)答均與人類(lèi)潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)相似。
DSS造模優(yōu)勢(shì)
葡聚糖硫酸鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium Salt, DSS）是一種聚陰離子衍生物，其誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型的機(jī)制雖仍未十分明確，但通常認(rèn)為與巨噬細(xì)胞功能失調(diào)、腸道菌群失調(diào)、DSS對(duì)結(jié)腸上皮的毒性作用、細(xì)胞因子在DSS結(jié)腸炎模型的發(fā)病中起重要作用等機(jī)制有關(guān)。
對(duì)比多種UC建模類(lèi)型，DSS造模具有很大優(yōu)勢(shì)：
- 癥狀與人類(lèi)UC高度相似：可用于研究結(jié)腸炎發(fā)生機(jī)制和藥效研究；
- 成模率高：自由飲用DSS水溶液，簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性強(qiáng)；
- 可構(gòu)建多種結(jié)腸炎模型：急性結(jié)腸炎、慢性結(jié)腸炎，還可以聯(lián)合AOM構(gòu)建結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥（CAC）模型；
- 適用于多種屬動(dòng)物造模：小鼠、大鼠、斑馬魚(yú)、豬、果蠅等；
- 安全性高：DSS可被自然生態(tài)系統(tǒng)降解，對(duì)環(huán)境安全。
Yeasen提供高品質(zhì)DSS（Cat#60316ES）：高純度，硫含量17-19%，游離硫＜0.2%，產(chǎn)品有大量文獻(xiàn)數(shù)據(jù)支持。
案例1 葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎
1. 實(shí)驗(yàn)方案
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：8周齡的BALB/c小鼠。
實(shí)驗(yàn)組：2.5% DSS飲用水，持續(xù)7天。
對(duì)照組：飲用水。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小鼠發(fā)展成結(jié)腸炎，表現(xiàn)為結(jié)腸變薄變短且上皮糜爛和潰瘍、隱窩膿腫、杯狀細(xì)胞喪失、粘液層喪失和大量嗜中性粒細(xì)胞滲入固有層。
圖1 DSS誘導(dǎo)的小鼠腸道炎癥
結(jié)腸圖片；B.結(jié)腸的內(nèi)窺鏡檢查；C. H&E染色的結(jié)腸切片；
箭頭指示：1. 縮短和出血的結(jié)腸；2. 脾臟腫大；3. 淺表性炎癥；4. DSS處理小鼠的上皮侵蝕和免疫細(xì)胞浸潤(rùn)）
2. 詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟
2.1稱(chēng)重標(biāo)記的對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)小鼠組
在DSS給藥的當(dāng)天(第0天)，應(yīng)稱(chēng)重標(biāo)記對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)小鼠組；DSS給藥前收集的糞便可用作檢測(cè)炎癥糞便標(biāo)記物時(shí)的對(duì)照。用高壓滅菌水制備DSS水溶液，對(duì)照組小鼠應(yīng)該得到相同量的水，但不含DSS。【注】通過(guò)測(cè)量剩余水觀察各組小鼠的水?dāng)z入量。
每天測(cè)量體重以及潛血的存在，用以下評(píng)分系統(tǒng)用于腸出血的比較分析。
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評(píng)分 |
糞便稠度描述 |
血細(xì)胞計(jì)數(shù)描述 |
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0分 |
正常糞便稠度 |
陰性（無(wú)血細(xì)胞） |
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1分 |
軟便 |
陽(yáng)性（輕微血細(xì)胞） |
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2分 |
大便非常軟且有血痕 |
血細(xì)胞計(jì)數(shù)增加，有血痕 |
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3分 |
水樣便 |
可見(jiàn)直腸出血，血細(xì)胞計(jì)數(shù)高 |
2.2收集糞便
將單只小鼠放置在沒(méi)有墊料的空籠子中15-30 min收集糞便。隨著DSS給藥的繼續(xù)和炎癥變得更加嚴(yán)重，收集所需的時(shí)間將會(huì)增加。用無(wú)菌鑷子，將糞便收集在微量離心管中，并用一個(gè)小球監(jiān)測(cè)潛血?！咀ⅰ坑糜跍y(cè)量炎癥標(biāo)記物的糞便應(yīng)-20℃凍存。
在開(kāi)始出血的前三天，體重可能會(huì)稍微增加，然后開(kāi)始逐漸減少。沒(méi)有硬性規(guī)定DSS應(yīng)該給藥7天，需由研究者根據(jù)顯著的體重減輕和血性腹瀉來(lái)決定何時(shí)處死小鼠。
2.3觀察結(jié)腸粘膜損傷
對(duì)DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸粘膜損傷進(jìn)行體內(nèi)直接觀察。在1.5-2.0%異氟烷麻醉下，用空氣膨脹結(jié)腸后，可以看到3 cm的近端結(jié)腸，可通過(guò)評(píng)估以下內(nèi)容對(duì)內(nèi)窺鏡損傷進(jìn)行評(píng)分。
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評(píng)分 |
結(jié)腸半透明性 |
腸壁上附著的纖維蛋白 |
粘膜顆粒性 |
血管形態(tài) |
糞便特征 |
管腔內(nèi)有無(wú)血液 |
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0分 |
完全透明 |
無(wú)纖維蛋白附著 |
無(wú)顆粒性 |
正常 |
正常 |
無(wú)血液 |
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1分 |
輕微半透明 |
少量纖維蛋白附著 |
輕微顆粒性 |
輕微異常 |
輕微腹瀉 |
少量血液 |
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2分 |
中度半透明 |
中量纖維蛋白附著 |
中度顆粒性 |
中度異常 |
中度腹瀉 |
中量血液 |
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3分 |
完全不透明 |
大量纖維蛋白附著 |
嚴(yán)重顆粒性 |
嚴(yán)重異常 |
嚴(yán)重腹瀉 |
大量血液 |
2.4研究上皮細(xì)胞的增殖遷移與腸滲透性
在處死前4h和24h，可給小鼠腹膜內(nèi)注射BrdU，通過(guò)對(duì)BrdU進(jìn)行組織學(xué)特異性染色來(lái)監(jiān)測(cè)腸上皮細(xì)胞的增殖和遷移。
處死當(dāng)天，小鼠應(yīng)禁食4h，灌胃給予溶于0.1 mL PBS中的FITC-Dextran(4或40 KDa，0.6 mg/g體重)，3h后放血收集無(wú)溶血的血清。腸滲透性與適當(dāng)稀釋的血清的熒光強(qiáng)度相關(guān)（激發(fā)488 nm；發(fā)射520 nm），通過(guò)在小鼠血清中連續(xù)稀釋已知量的FITC-Dextran來(lái)制備FITC-葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
【注】為了對(duì)腸道炎癥進(jìn)行定量測(cè)量，可通過(guò)ELISA試劑盒測(cè)量血清角質(zhì)細(xì)胞衍生趨化因子(KC)和/或脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2(與疾病活動(dòng)相關(guān))。因此，KC以1:2或1:4稀釋對(duì)照血清樣品，脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2以1:200稀釋對(duì)照血清樣品，來(lái)自DSS處理的小鼠的樣品需要更高的稀釋度。
2.5脾臟、結(jié)腸稱(chēng)重以及結(jié)腸長(zhǎng)度測(cè)量
噴灑70%乙醇，通過(guò)腹部中線切口小心地打開(kāi)小鼠肚子，取出脾臟。脾臟重量的增加通常與炎癥和貧血的程度相關(guān)。
在收集結(jié)腸之前，如果計(jì)劃研究腸系膜淋巴結(jié)的增大、表征免疫細(xì)胞群和/或分析與DSS誘導(dǎo)的病理學(xué)相關(guān)的腸道細(xì)菌移位，則應(yīng)分離腸系膜淋巴結(jié)。
用鑷子提起結(jié)腸，小心地拉，直到可以看見(jiàn)盲腸。將結(jié)腸和盲腸從回盲部的小腸和直腸遠(yuǎn)端的肛門(mén)中分離出來(lái)。此時(shí)，可以拍攝所有小鼠組或每組一名代表從盲腸到直腸的腸的大體照片。測(cè)量長(zhǎng)度，拉直結(jié)腸，但不要拉伸。然后可以將結(jié)腸從盲腸中分離出來(lái)，并使用冷PBS快速?zèng)_洗以除去糞便和血液。盲腸可以廢棄，因?yàn)镈SS在該區(qū)域很少或沒(méi)有誘導(dǎo)炎癥。
【注】用PBS沖洗后，可以取結(jié)腸重量。根據(jù)觀察到的組織消耗，嚴(yán)重發(fā)炎的結(jié)腸顯示出重量減輕。
2.6結(jié)腸過(guò)氧化物酶(MPO)檢測(cè)
結(jié)腸MPO是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志，其在組織中的濃度與中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的程度相關(guān)。稱(chēng)量結(jié)腸組織(50-100 mg )，并在PBS中徹底清洗，直到?jīng)]有糞便物質(zhì)，并在-80°C下儲(chǔ)存，直到進(jìn)行分析。
2.7qRT-PCR分析
將一片結(jié)腸(50 mg)置于RNAlater中，直到提取RNA。對(duì)于更長(zhǎng)時(shí)間的儲(chǔ)存，RNAlater中的組織應(yīng)在-20℃下冷凍。在提取RNA的當(dāng)天，從RNAlater中去除結(jié)腸，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)程序提取RNA。由于已知結(jié)腸組織中的微量DSS會(huì)干擾PCR擴(kuò)增，因此有必要通過(guò)氯化鋰法去除所有多糖，包括DSS。
2.8組織學(xué)染色
縱向切開(kāi)每一片結(jié)腸，用PBS浸濕的牙簽包住，放入盒中。在10%福爾馬林緩沖液中固定24h后，轉(zhuǎn)移到70%乙醇中直到分析。對(duì)于使用特定抗體的特殊染色(如免疫組織化學(xué)、免疫熒光)，建議將冷凍切片固定在防凍包埋介質(zhì)OCT中。如果研究粘蛋白層和細(xì)菌粘附/移位，不要用PBS沖洗結(jié)腸，并浸入Carnoy溶液中，因?yàn)檫@可以保留粘液結(jié)構(gòu)。福爾馬林固定的結(jié)腸組織可以使用BrdU抗體進(jìn)行BrdU染色。其次，Ki67可用于測(cè)量上皮細(xì)胞增殖。
組織學(xué)評(píng)分：可以以如下方式對(duì)H & E染色的結(jié)腸組織進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分。根據(jù)粘膜、粘膜下層和肌層/漿膜的上皮損傷和炎性浸潤(rùn)的程度，給每個(gè)切片分配四個(gè)分?jǐn)?shù)。如果是局部性改變，都乘以1，如果是斑片狀改變，都乘以2，如果是彌漫性改變，都乘以3。最后將每個(gè)結(jié)腸的4個(gè)單獨(dú)得分相加，得到每個(gè)小鼠的總得分范圍為0-36。
2.9體外培養(yǎng)洗滌的菌落
縱向切開(kāi)的結(jié)腸(約1.0 cm)應(yīng)在HBSS中用1.0%抗生素(青霉素和鏈霉素)連續(xù)清洗三次。將洗滌過(guò)的菌落置于含有1.0 mL無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)基和1.0%抗生素(青霉素和鏈霉素)的孔(24孔板)中，并在37°C和5.0% CO2下孵育24h。收集上清液，在4°C離心10 min，并在-80°C下儲(chǔ)存，直到分析促炎細(xì)胞因子。
【注】DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的成功和可重復(fù)誘導(dǎo)取決于許多關(guān)鍵因素，包括DSS來(lái)源、批號(hào)、分子量、濃度、持續(xù)時(shí)間、小鼠品系、來(lái)源、年齡、性別和體重以及環(huán)境因素，包括動(dòng)物飼養(yǎng)所的衛(wèi)生條件。如果觀察到高死亡率，表明對(duì)DSS高度敏感，應(yīng)減少DSS的劑量。如果未觀察到結(jié)腸炎或結(jié)腸炎較輕，表明易感性較低，應(yīng)考慮增加DSS濃度/和/或持續(xù)時(shí)間。
3實(shí)驗(yàn)結(jié)論
DSS結(jié)腸炎模型在理解腸道炎癥的病理生理學(xué)方面有很重要的作用，為活性IBD的理論和臨床認(rèn)識(shí)提供了依據(jù)。DSS結(jié)腸炎模型可以用來(lái)研究日益復(fù)雜的腸道環(huán)境的任何方面的貢獻(xiàn)，或評(píng)估旨在預(yù)防或改善疾病的干預(yù)措施。DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型將繼續(xù)為宿主遺傳、腸道先天免疫、微生物群、飲食和其他環(huán)境因素在維持胃腸道穩(wěn)態(tài)之間的相互作用提供有價(jià)值的機(jī)制線索。
4其他注意事項(xiàng)
1）小鼠選擇
成功且容易復(fù)制的DSS結(jié)腸炎誘導(dǎo)的最佳年齡在6-8周之間，優(yōu)選8周齡。推薦C57BL/6J和BALB/c小鼠，因?yàn)樗鼈冊(cè)谖墨I(xiàn)中普遍存在。
2）建議盡可能少地更換籠子
因?yàn)槭箢?lèi)的糞食作用有助于關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的再循環(huán)。每天更換籠子可能會(huì)導(dǎo)致食物和水的消耗增加。如果任何籠子需要更換，所有組的籠子應(yīng)同時(shí)更換。
3）最好在給藥當(dāng)天制備DSS水
DSS水應(yīng)在服用前用磁力攪拌棒徹底混合并完全溶解，未溶解的鹽可能會(huì)堵塞水瓶的出水口或影響水的攝入，從而可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。制備DSS溶液時(shí)，最好使用高壓滅菌水，對(duì)照組應(yīng)該喝同樣的水。
4）建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)
建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，2-3個(gè)濃度，每個(gè)濃度2-3只小鼠，選取最佳的DSS劑量。
案例2 DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎與脂肪組織和肝臟脂質(zhì)代謝的相關(guān)研究
1實(shí)驗(yàn)方案
1.1 8周齡C57BL/6L雄性小鼠
實(shí)驗(yàn)組：1%、2%和3% 的DSS水持續(xù)7天，飲用水持續(xù)7天，共3個(gè)循環(huán)。
對(duì)照組：飲用水。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小鼠發(fā)展成結(jié)腸炎，表現(xiàn)為體重顯著下降和疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分顯示的結(jié)腸炎嚴(yán)重程度顯著增加，DSS處理的小鼠還表現(xiàn)出與緊密連接功能和粘液層形成相關(guān)的基因表達(dá)顯著降低，DSS處理的小鼠結(jié)腸切片顯示顯著的全層炎癥，炎癥評(píng)分增加，隱窩損傷、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)到固有層以及上皮和粘膜結(jié)構(gòu)的改變。
圖2 DSS誘導(dǎo)的小鼠慢性結(jié)腸炎
（A.實(shí)驗(yàn)方案；B.體重變化；C.疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）的變化；D.結(jié)腸重量；E.結(jié)腸長(zhǎng)度；F.閉鎖蛋白的蛋白表達(dá)；G.緊密連接蛋白；M.結(jié)腸段和結(jié)腸組織的H&E染色代表性圖像和結(jié)腸組織以及代表炎癥評(píng)分的圖表）
1.2 18周齡C57BL/6L雄性小鼠
實(shí)驗(yàn)組：慢性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組（2% DSS）和急性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組（3% DSS）。對(duì)于慢性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，DSS處理組需要3個(gè)周期，每個(gè)周期包含5天的DSS飲用水和5天的飲水恢復(fù)期；對(duì)于急性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，小鼠接受了7天的DSS治療，隨后是3天的飲水恢復(fù)期。
對(duì)照組：飲用水。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小鼠發(fā)展成結(jié)腸炎，表現(xiàn)為體重顯著下降和疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分顯示的結(jié)腸炎嚴(yán)重程度顯著增加，DSS處理的小鼠還表現(xiàn)出與緊密連接功能和粘液層形成相關(guān)的基因表達(dá)顯著降低，DSS處理的小鼠結(jié)腸切片顯示顯著的全層炎癥，炎癥評(píng)分增加。
圖3 DSS誘導(dǎo)的老年小鼠結(jié)腸炎
（A.實(shí)驗(yàn)方案；B.體重變化；C.疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）的變化；J.結(jié)腸段和結(jié)腸組織的H&E染色代表性圖像和結(jié)腸組織以及代表炎癥評(píng)分的圖表；K.小鼠的組織重量；L.肝切片H&E染色代表性圖像；M.總膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白膽固醇水平）
2詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟
2.1 DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型
8周齡的小鼠設(shè)置：0（陰性對(duì)照組），1%，2%，和3%（w/v）DSS處理組。DSS處理組需要3個(gè)周期，每個(gè)周期包含7天的DSS飲用水和7天的飲水恢復(fù)期。
18周齡的雄性小鼠設(shè)置：非DSS處理對(duì)照組，慢性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組（2% DSS）和急性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎組（3% DSS）。對(duì)于慢性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，DSS處理組需要3個(gè)周期，每個(gè)周期包含5天的DSS飲用水和5天的飲水恢復(fù)期。對(duì)于急性DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，小鼠接受了7天的DSS治療，隨后是3天的飲水恢復(fù)期。
【注】在DSS治療和恢復(fù)周期期間，每天記錄體重、糞便硬度以及直腸或糞便中的出血情況。
2.2結(jié)腸炎嚴(yán)重程度的評(píng)估
2.2.1疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分
DAI由體重相對(duì)下降、糞便硬度和直腸或糞便中的血液等因素決定。
體重下降評(píng)分
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評(píng)分 |
體重變化范圍 |
描述 |
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0分 |
0% |
與初始體重相比無(wú)下降 |
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1分 |
1-5% |
體重下降在1-5%之間 |
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2分 |
5-10% |
體重下降在5-10%之間 |
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3分 |
10-20% |
體重下降在10-20%之間 |
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4分 |
>20% |
體重下降超過(guò)20% |
糞便硬度評(píng)分
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評(píng)分 |
糞便狀態(tài)描述 |
描述細(xì)節(jié) |
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0分 |
正常 |
固體顆粒，形狀規(guī)則 |
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1分 |
軟但呈顆粒狀 |
糞便較軟，但仍保持顆粒狀 |
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2分 |
糞便松散但有一定固體 |
糞便結(jié)構(gòu)松散，含有一些固體成分 |
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3分 |
糞便松散有液體跡象 |
糞便松散，有明顯的液體成分 |
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4分 |
水樣腹瀉 |
糞便呈水樣，完全無(wú)固體成分 |
直腸/糞便出血評(píng)分
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評(píng)分 |
血液跡象描述 |
描述細(xì)節(jié) |
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0分 |
無(wú)血液跡象 |
糞便中無(wú)可見(jiàn)血液 |
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1分 |
無(wú)出血 |
無(wú)明顯出血，糞便中無(wú)血液跡象 |
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2分 |
輕微出血 |
糞便中可見(jiàn)輕微的血液跡象 |
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3分 |
血性腹瀉 |
糞便中血液較多，呈現(xiàn)血性腹瀉 |
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4分 |
嚴(yán)重出血 |
糞便中血液大量，嚴(yán)重出血情況 |
2.2.2蘇木精和伊紅（H&E）染色進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)評(píng)估
新鮮結(jié)腸組織用冷PBS洗滌，縱向切成3部分，其中一部分在PBS緩沖的10%甲醛中固定，包埋在石蠟中，然后切成5 μm厚的切片進(jìn)行H&E染色。使用光學(xué)顯微鏡觀察炎癥跡象、細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化以及上皮和粘膜損傷，以評(píng)分組織形態(tài)。
組織形態(tài)的評(píng)分如下：高倍視野（400×）的炎癥細(xì)胞（如多形核白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和巨大細(xì)胞）數(shù)量評(píng)分：0分（正常組織）；1分（罕見(jiàn)，1-5/phf）；2分（輕微增加，5-10/phf）；3分（更明顯的增加）；4分（顯著增加，密集）。
白細(xì)胞浸潤(rùn)的程度評(píng)分：0分（罕見(jiàn)，1-5/phf）；1分（固有層顯著增加，5-10/phf）；2分（粘膜下部分融合）；3（全層浸潤(rùn)）。
纖維化的嚴(yán)重程度評(píng)分：0分（正常）；1分（輕微）；2分（中等）；3分（嚴(yán)重）；4分（非常嚴(yán)重）。
上皮損傷評(píng)分：0分（正常組織）；1分（失去基底三分之一的隱窩）；2分（失去基底三分之二的隱窩）；3分（整個(gè)隱窩喪失）；4分（局灶性侵蝕）；5分（融合性侵蝕）。
粘膜損傷評(píng)分：0分（正常組織）；1分（1或2個(gè)潰瘍?cè)睿?分（3或4個(gè)潰瘍?cè)睿?分（融合或廣泛潰瘍）。
2.2.3血漿分析
通過(guò)心臟穿刺獲取新鮮血液，收集在采血管中，然后在18°C下以15000 g離心5 min，分離出的血漿在-70°C下冷凍直至分析。測(cè)量血漿中的甘油三酯（TG）、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇（HDL）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL）、AST和ALT水平，使用試劑盒測(cè)量血漿脂多糖（LPS）水平。
2.2.4實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）
提取總RNA，并將2 μg提取的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA，使用qPCR Master Mix試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。對(duì)酸性核糖體磷酸蛋白（Arbp）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、ZO-1、咬合蛋白、MUC2、MUC13、白細(xì)胞介素17（IL-17）、腫瘤壞死因子α（TNFα）、IL-1β、干擾素γ（IFNγ）、IL-4、IL-6、IL-22、IL-23、F4/80、CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（CHOP）、脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體1（AdipoR1）、AdipoR2、載脂蛋白A1（ApoA1）、ApoB、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白（MTP）、肝X受體α（LXRα）、膽固醇7α-羥化酶（CYP7A1）、CYP7B1、CYP27A1、CYP8B1等的基因轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行定量。每個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)水平使用ΔΔ Ct方法計(jì)算，并標(biāo)準(zhǔn)化為Arbp或GAPDH的表達(dá)。
2.2.5肝組織組織學(xué)分析
肝組織標(biāo)本在10%緩沖甲醛中固定，包埋在石蠟中，切成5 μm厚度，并用蘇木精和伊紅（H&E）染色，在光學(xué)顯微鏡下以400倍放大獲取圖像。使用甘油三酯（TG）測(cè)定試劑盒測(cè)定肝臟中的甘油三酯（TG）水平。
2.2.6蛋白印跡分析
針對(duì)AMPK、BiP、CD36、CHOP、FAS、FGF21、HSL、咬合蛋白、磷酸化AMPK（Tr172）、磷酸化HSL（Ser563）、SCD1、UCP1、β-actin和GAPDH的抗體作為一抗，其次是抗兔IgG-HRP偶聯(lián)的二抗。免疫印跡通過(guò)ECL進(jìn)行可視化，并使用ImageJ軟件進(jìn)行密度分析。
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
急性或慢性硫酸葡聚糖（DSS）處理的年輕和老年小鼠都發(fā)展出了結(jié)腸炎，這通過(guò)體重下降、結(jié)腸長(zhǎng)度縮短、疾病活動(dòng)指數(shù)和炎癥評(píng)分升高得到證實(shí)。它們還顯示出與腸道屏障功能相關(guān)的蛋白表達(dá)降低和血漿脂多糖水平升高，這表明DSS誘導(dǎo)的屏障功能障礙和隨之而來(lái)的通透性增加。結(jié)腸炎小鼠它們呈現(xiàn)出肝臟內(nèi)脂肪積聚以及血脂水平異常的特征。這種DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎相關(guān)脂質(zhì)代謝功能障礙是由于包括脂肪酸氧化、脂質(zhì)生成、脂解、膽固醇逆向運(yùn)輸、膽汁酸合成以及白色脂肪組織褐變和棕色脂肪組織產(chǎn)熱在內(nèi)的整體代謝過(guò)程的破壞，這些過(guò)程大多數(shù)是通過(guò)能量穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子如FGF21、脂聯(lián)素和irisin，通過(guò)SIRT1/PGC-1α和LXRα依賴(lài)性途徑介導(dǎo)的。
相關(guān)產(chǎn)品推薦
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
應(yīng)用場(chǎng)景 |
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60316ES |
25 g/100 g/500 g/1000 g |
常被用于誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型。 |
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60751ES |
1 mg/5 mg/10 mg （液體：135 mM in Water） |
與葡聚糖硫酸鈉鹽DSS 一起用于結(jié)直腸癌的小鼠模型創(chuàng)建。 |
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60736ES |
Low Density Lipoprotein Cholesterol Content Assay kit 低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量檢測(cè)試劑盒（微量法） |
96T |
測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇含量。 |
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60737ES |
High Density Lipoprotein Cholesterol Content Assay Kit 高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量檢測(cè)試劑盒（微量法） |
96T |
測(cè)定高密度脂蛋白膽固醇含量。 |
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61220ES |
5 mg/10 mg/50 mg |
評(píng)估腸的滲透性。 |
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61223ES |
5 mg/10 mg/50 mg |
評(píng)估腸的滲透性。 |
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18820ES |
5 T/50 T/200 T |
能高效獲得優(yōu)質(zhì)的糞便DNA，有利于后續(xù)對(duì)腸道微生物的研究。 |
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60524ES |
2×100 mL |
用于免疫組化中組織切片，血涂片，骨髓切片的染色。 |
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60403ES |
100T |
對(duì)慢性消化道出血，如：消化性潰瘍等的研究篩選均具有重要價(jià)值。 |
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60534ES |
6×50 mL/6×100 mL |
可鑒別同一組織中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。 |
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41403ES |
500 mL |
最常用的緩沖溶液。 |
DSS結(jié)腸炎建模用葡聚糖硫酸鈉鹽MW:36000~50000發(fā)表文獻(xiàn)（不完全統(tǒng)計(jì)）
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[3] Tong, L, et al. Milk-derived extracellular vesicles alleviate ulcerative colitis by regulating the gut immunity and reshaping the gut microbiota. Theranostics 2021, 11 (17), 8570-8586. DOI: 10.7150/thno.62046. (IF: 11.56)
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參考文獻(xiàn)
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[2] Kwon, J., Lee, C., Heo, S. et al. Sci Rep 11, 5283 (2021).
