攻略一：了解細胞污染
古人云：知己知彼方可百戰(zhàn)百勝，因此了解細胞污染是非常重要的。常見的污染類型有細菌污染、真菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、病毒污染以及非同種細胞污染。
1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡高倍鏡下大多可見，根據(jù)感染細菌種類不同，呈現(xiàn)不同的外形。其培養(yǎng)基一般會變渾濁、變黃較快，對細胞生狀態(tài)影響明顯。
圖1：細胞受到細菌污染圖
2、真菌：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，呈珊瑚狀，隨時間轉(zhuǎn)移會長出黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，一般培養(yǎng)基清亮，不變色，不如細菌易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在，細胞污染就比較嚴重了，也很難救活。
圖2：細胞受到真菌污染圖
3、支原體：細菌和真菌造成的污染相對容易發(fā)現(xiàn)，然而支原體造成的污染很難察覺，即使生長密度高達107-109CFU/ml，也很難有污染跡象（渾濁、pH變化等）。支原體污染后導(dǎo)致細胞生長變慢，狀態(tài)變差，不會馬上使細胞致死，但會影響細胞內(nèi)的各種參數(shù)，如改變細胞新陳代謝，改變DNA轉(zhuǎn)染效率。支原體感染細胞以后，細胞病變不明顯，只是慢慢死去。
4、黑膠蟲*：一般低倍鏡下觀察呈黑色點狀，高倍鏡下可看見黑色物蠕動，培養(yǎng)液不易變渾濁，在細胞增殖旺盛之后會減少或消失。有時也會出現(xiàn)觀測到的運動物明顯增多，細胞狀態(tài)變差，最終死亡。（*對于黑膠蟲沒有明確的定論，通常認為黑色物是由于多種原因?qū)е录毎麪顟B(tài)變差、死亡產(chǎn)生的碎片）
圖4：細胞受到黑膠蟲污染圖
5、原蟲*：該污染在顯微鏡下易觀察到，輕微活動，細胞能生長但繁殖速度明顯減慢，培養(yǎng)基產(chǎn)生渾濁，細胞狀態(tài)差，邊緣不清楚，細胞不透亮。其能與細胞共生并爭奪培養(yǎng)基營養(yǎng)，當?shù)竭_一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，導(dǎo)致細胞死亡。（*對于原蟲污染傾向于是細菌類污染）
圖5：細胞受到原蟲污染圖
6、病毒：由于病毒過小導(dǎo)致培養(yǎng)過程中難以觀察。由于在獲得原代細胞過程中沒有完全除去潛在的病毒，導(dǎo)致病毒污染。盡管病毒污染對細胞原代培養(yǎng)不會造成太大影響，但對下游工業(yè)生產(chǎn)如生產(chǎn)疫苗等造成安全隱患，因此需要盡量去除。
圖6：病毒入侵猴肝臟細胞層圖像（圖 源自悉尼大學(xué)）
7、非同種細胞污染 ：這個主要指不同種類細胞產(chǎn)生的交叉污染，由于細胞培養(yǎng)過程中不同種類細胞株所需器材和溶液沒有嚴格分開，導(dǎo)致細胞交叉污染。據(jù)報道，世界上已有多種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效，因此避免非同種細胞污染也需要引起實驗者的重視。
圖7：細胞受到非同種細胞污染圖
攻略二：污染的預(yù)防
細胞污染是比較難處理，因此預(yù)防就顯的尤為重要。對于預(yù)防可從以下幾方面著手：
1、 使用抗生素：對細胞培養(yǎng)基使用雙抗（在細胞培養(yǎng)基中推薦青霉素的工作濃度為100U/ml，鏈霉素為0.1mg/ml。）
2、 支原體預(yù)防：可以使用支原體預(yù)防試劑預(yù)防支原體的污染產(chǎn)生。
3、培養(yǎng)器材、用品需消毒滅菌：細胞培養(yǎng)所用器材要清洗消毒，各種溶液滅菌處理。
4、實驗操作者的無菌意識
①洗手消毒，穿隔離衣。工作開始時要用酒精棉球擦手并對器皿進行酒精擦拭；
②操作需在生物安全柜內(nèi)并佩戴口罩；
③盡量使用一次性無菌器材操作，對于多次使用的需實高壓滅菌處理。實驗完畢用酒精擦拭操作臺面。
5、細胞交叉污染的預(yù)防
①一次對多種細胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴格區(qū)分；
②在進行換液或傳代操作時盡量避免液體濺出污染其他細胞；
③新購細胞應(yīng)及時留種凍存，如遇污染可重新復(fù)蘇。
6、無菌室或細胞房的污染預(yù)防
①使用0.1%新潔爾滅對細胞房或無菌室進行全面徹底擦洗;
②使用紫外燈長時間（0.5-2h）照射；
③使用甲醛熏蒸法。
攻略三：污染的去除
細胞培養(yǎng)過程中難免會遇到細胞污染，怎么辦？？
1、多數(shù)污染是較難完全去除，如果污染的細胞非珍貴且有備用，宜舍棄;
2、找到污染源后并清除掉，可復(fù)蘇凍存細胞或重新購置細胞培養(yǎng)；
3、若污染細胞很珍貴，一時難覓新，針對不同污染小翌給您如下建議。
攻略四：相關(guān)推薦
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類型 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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抗細菌 |
60162ES76 |
100 mL |
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60230ES07/60 |
3.2/100g |
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60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
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60223ES25/60 |
25/100mg |
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抗真菌 |
60238ES01/03 |
100mg/1g |
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60219ES08 |
5g |
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60231ES03/08 |
1/5mg |
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支原體檢測 |
40601ES10/20 |
10 /20 assays |
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40611ES25/60 |
25/100T |
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支原體去除 |
40605ES02/03/08 |
1/2/10×500ml |
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40607ES03/08 |
1/5ml |
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支原體預(yù)防 |
MycAway™ Prophylactic (2000×) - Mycoplasma Prevention Reagent |
40608ES03/08 |
1/5ml |
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40609ES60 |
100ml |
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|
40610ES60 |
100ml |
