金擔(dān)子素A，又名Aureobasidin A、AbA、Basifungin、短梗霉素A，是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素，是一種是一種環(huán)狀肽、抗真菌的抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力，是肌醇磷酸化神經(jīng)酰胺合成酶AUR1的抑制劑。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/mL)即可對(duì)酵母產(chǎn)生毒性。對(duì)其敏感的真菌種類包括：出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用機(jī)制是Aureobasidin A抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide, IPC)合成酶的活性，干擾鞘脂合成，從而進(jìn)一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1基因，以及構(gòu)巢曲霉的AURA基因，兩者具有同源性。通過對(duì)這些編碼基因進(jìn)行突變即可使得菌株對(duì)Aureobasidin A產(chǎn)生抗性，如AUR1-C基因。

Aureobasidin A非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標(biāo)記。Aureobasidin A抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報(bào)告子。本品為溶于甲醇的Aureobasidin A溶液，濃度為1 mg/mL。具體的工作濃度取決于宿主細(xì)胞的敏感度（見表1. AbA對(duì)各種酵母菌的最低抑菌濃度(MIC)）。

表1 Aureobasidin A對(duì)各種酵母菌的最低抑菌濃度

菌株		MIC（µg/mL）
S.cerevisiae	ATCC9763（diploid）	0.2-0.4
	SH3328（haploid）	0.1
	Sake yeast（diploid）	0.1-0.2
	Shochu yeast（diploid）	0.1
	Beer yeast（triploid or tetraploid）	0.1
	Baker’s yeast（diploid）	0.2-0.4
Schizo.pombe	JY-745（monoploid）	0.1
C.albicans	TIMM-0136（diploid）	0.04
C.tropicalis	TIMM-0324（diploid）	0.08

 

產(chǎn)品性質(zhì)

英文別名（English Synonym）	Aureobasidin A; AbA; Basifungin
中文名稱 (Chinese Name)	金擔(dān)子素; 金擔(dān)子素A; 短梗霉素A
CAS號(hào)（CAS NO.）	127785-64-2
分子式（Formula）	C60H92N8O11
分子量（Molecular weight）	1101.42 g/mol
外觀（Appearance）	液體溶液
純度（Purity）	≥97%
溶解性（Solubility）	粉末易溶于DMSO和甲醇(0.5-10 mg/mL)；不溶于水
結(jié)構(gòu)式（Structure）

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期2年。建議分裝后-20℃干燥保存，避免反復(fù)凍融。不建議4℃和常溫下長期存放。

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1. 酵母雙雜交研究

2. 酵母單雜交研究

3. 嚴(yán)格的酵母藥物選擇標(biāo)記

4. Aureobasidin A抗性是酵母雜交研究的理想報(bào)告因子  

 

操作步驟（抗AbA的酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng)）

1. 加入0.5 mL過夜培養(yǎng)的酵母到50 mL YPD培養(yǎng)基中（配方：1 L液體培養(yǎng)基含有10 g yeast extract，20 g polypeptone，20 g D-glucose；固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂）。

2. 30℃培養(yǎng)約6小時(shí)，測(cè)定OD₆₆₀為1-2。使用二倍體時(shí)，測(cè)定OD₆₆₀為2-4。

3. 1,000×g離心5分鐘。

4. 用10 mL Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mM Tris-HCl pH 7.5，1 mM EDTA）懸浮沉淀，1,000×g離心5分鐘。

5. 用Solution A重懸沉淀，直到OD₆₆₀為150。

6. 在管內(nèi)分取100 µL細(xì)胞懸浮液，30℃培養(yǎng)1小時(shí)。

7. 加入5 µg載體（環(huán)狀或線性DNA）和150 µg Carrier DNA（已經(jīng)過100℃加熱10分鐘，并迅速冷卻）。

注：pAUR101需使用線性DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。使用環(huán)狀DNA會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率甚至轉(zhuǎn)化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。

8. 加入850 µL Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 mL Solution A充分溶解，需要現(xiàn)用現(xiàn)配），輕輕混勻。

9. 30℃培養(yǎng)30分鐘后，42℃培養(yǎng)15分鐘。

10. 室溫放置10分鐘。

11. 5,000 rpm離心1分鐘，用5 mL YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀。

12. 30℃培養(yǎng)6小時(shí)~過夜。

13. 5,000~10,000 rpm離心，用1-10 mL 0.9% NaCl懸浮沉淀。

14. 在YPD選擇培養(yǎng)基平板（含一定濃度的AbA，依菌株類型而定）上接種100 µL細(xì)胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉(zhuǎn)化完成。

15. 挑取陽性轉(zhuǎn)化子，和/或測(cè)定轉(zhuǎn)化效率（以每微克質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化的菌落數(shù)來表示）。

 

注意事項(xiàng)

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2. 本產(chǎn)品僅用于科研用途，禁止用于人身上。

3. AbA的最佳工作濃度因宿主細(xì)胞不同而有差異，可根據(jù)最低抑菌濃度(MIC)來確定。

 

產(chǎn)品應(yīng)用場(chǎng)景和主要特點(diǎn)  

應(yīng)用場(chǎng)景	名稱	貨號(hào)	主要特點(diǎn)
原生質(zhì)體制備	Snailase 蝸牛酶	10404ES	來源于蝸牛的混合酶，可降解植物細(xì)胞壁。
生長調(diào)節(jié)劑 (生長促進(jìn)劑 生長延緩劑 新型植物激素）	Zeatin 玉米素	41001ES	從幼嫩的玉米芯中發(fā)現(xiàn)分離出來的，促進(jìn)側(cè)芽生長，刺激細(xì)胞分化，促進(jìn)愈傷組織和種子發(fā)芽，還能防止葉片衰老。
	Trans-Zeatin 反玉米素	41002ES	高純的反式玉米素，適用于植物組織培養(yǎng)。
	Trans-Zeatin-Riboside 反玉米素核苷	41003ES	是一種活性高且應(yīng)用廣泛的天然合成細(xì)胞分裂素，功能上不僅促進(jìn)細(xì)胞分裂，刺激莖芽增殖，抑制根的生成，阻止葉片衰老，還能激活基因表達(dá)和代謝活性。
	Indole-3-acetic acid(IAA)3-吲哚乙酸	40509ES	適用于植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)。
	(+)-Abscisic acid(ABA) (+)-脫落酸	41004ES	抑制幼苗生長。
	rac-GR24(strigolactone analog) 獨(dú)腳金內(nèi)酯	41012ES	近年來發(fā)現(xiàn)的一種植物激素或其前體，能夠抑制植物的分枝和側(cè)芽的生長。
抗生素 (抗細(xì)菌 抗真菌 抗性篩選）	Timentin 特美汀	60230ES	特美汀對(duì)革蘭陽性菌、陰性菌、需氧及厭氧菌的抗菌范圍甚廣。
	Gentamicin Sulfate Salt 硫酸慶大霉素	60214ES	實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用非常普遍：微生物學(xué)研究，細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制細(xì)菌污染，分子生物學(xué)研究
	Penicillin G,Sodium Salt青霉素G鈉鹽	60208ES	主要對(duì)革蘭氏陽性菌有效，作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，對(duì)人類的毒性較小。
	Penicillin-Streptomycin,青霉素-鏈霉素	60162ES	有效抑制多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長，從而有效控制細(xì)胞被細(xì)菌污染。
	Rifampicin 利福平	60234ES	有效的廣譜抗菌抗生素。
	Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素	60206ES	對(duì)革蘭氏陽性菌和陰性菌及支原體都有抑制作用。
	Aureobasidin A(AbA)金擔(dān)子素A	60231ES	一種環(huán)狀肽、抗真菌的抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力，主要抗酵母菌。
	Hygromycin B 潮霉素B	60225ES	用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。
	G418 Sulfate(Geneticin) 遺傳霉素	60220ES	將抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對(duì)G418的耐藥性，從而用來篩選攜帶抗性基因的細(xì)胞。
除草劑	Glyphosate 草甘膦(甘草磷),95%	41011ES	對(duì)多年生的惡習(xí)性雜草如茅草、香附子、狗牙根有很好的防除效果。
	Glufosinate-ammonium草銨膦	60221ES	毒性低，活性高，廣譜的非選擇性除草劑，其有效成分是草丁膦。
	Bialaphos 雙丙氨膦	60235ES	用于篩選含有抗性基因的基因工程細(xì)胞系，且在玉米培養(yǎng)中比草銨膦的活性強(qiáng)。

 

使用濃度

【具體使用濃度請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn)，并根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件（如實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?xì)胞種類，培養(yǎng)特性等）進(jìn)行摸索和優(yōu)化。】

 

使用方法（數(shù)據(jù)來自于公開發(fā)表的文獻(xiàn)，僅供參考）

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（體外實(shí)驗(yàn)）

Aureobasidin A通過神經(jīng)酰胺毒性和必需肌醇磷酸化神經(jīng)酰胺的抑制而抑制酵母細(xì)胞的生長。^[1] 

利用合適的酶切位點(diǎn)將所有DNA片段克隆到Y(jié)1H載體pAbAi中，根據(jù)酵母轉(zhuǎn)化系統(tǒng)2手冊(cè)(Clontech, Mountain View, USA)，將構(gòu)建好的pAbAi用BstbI線性化，轉(zhuǎn)化到釀酒酵母Y1HGold菌株。攜帶目的DNA片段的克隆在添加了Aureobasidin A (濃度為100-900 ng/mL)的合成尿嘧啶脫落培養(yǎng)基上成功進(jìn)行篩選。^[2] 

將SlBES1基因的開放閱讀框(ORFs)擴(kuò)增并連接到pGBKT7-GAL4BD質(zhì)粒中， 將融合蛋白GAL4BD-SlBES1轉(zhuǎn)化至Y2H金酵母細(xì)胞中，SD/−Trp培養(yǎng)基用于培養(yǎng)酵母轉(zhuǎn)化，用X-α-gal鑒定轉(zhuǎn)化子α-半乳糖苷酶活性，用Aureobasidin A篩選AUR1-C的基因表達(dá)。^[3] 

客戶使用本產(chǎn)品發(fā)表的文獻(xiàn) 

研究中使用的載體pAbAi含有尿嘧啶報(bào)告基因Ura3和對(duì)Aureobasidin A (AbA)耐藥的選擇性基因AUR1-C，將目標(biāo)序列F16、F20或F73分別插入到AUR1-C基因上游的多個(gè)克隆位點(diǎn)。為了避免酵母內(nèi)源轉(zhuǎn)錄因子與目標(biāo)順式元件相互作用的干擾，事先確定用于單個(gè)酵母菌落選擇的最低AbA濃度。將3種酵母和含p53-AbAi陽性對(duì)照分別懸浮在0.9% NaCl中，OD₆₀₀調(diào)整為0.005。隨后，將100μL樣品涂于含0、100、200、500和1000 ng/mL AbA的SD/-Ura固體介質(zhì)(Yeasen Co., China)表面。將平板倒置，在30℃下培養(yǎng)3-5天，AbA的適宜濃度為500 ng/mL。^[4]

圖1 GmWRKY31蛋白與含有F16、F20、F73、delF16、delF20或delF73片段的酵母菌互作

 
相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
Ciprofloxacin hydrochloride 環(huán)丙沙星鹽酸鹽	60201ES05/25/60	5/25/100g
Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青霉素鈉	60202ES08/25/60	5/25/100g
Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青霉素鈉	60203ES10/60	10/100g
Doxycycline hyclate 鹽酸強(qiáng)力霉素	60204ES03/08/25	1/5/25g
Chloramphenicol,USP Grade 氯霉素，USP級(jí)	60205ES08/25/60	5/25/100g
Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素	60206ES10/60	10/100g
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽	60210ES25/76	25/500 mg
Tetracyclin HCl 四環(huán)素鹽酸鹽（USP）	60212ES25/60	25/100g
Vancomycin Hydrochloride 鹽酸萬古霉素	60213ES60/80/90	100mg/1g/5g
Gentamycin Sulfate Salt 硫酸慶大霉素	60214ES03/08/25	1/5/25g
Spectinomycin Hydrochloride 鹽酸壯觀霉素	60215ES08	5g
鹽酸博萊霉素	60216ES62/80	125/8×125mg
Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素	60217ES20/60	20/5×20mg
Blasticidin S 殺稻瘟菌素S （滅瘟素）	60218ES10/60	10/10×10mg
Nystatin 制真菌素	60219ES08	5g
G418 Sulfate (Geneticin) 遺傳霉素	60220ES03/08	1/5g
Hygromycin B 潮霉素B	60225ES03/10	1/10g
Erythromycin 紅霉素	60228ES08/25	5/25g
Timentin 特美汀	60230ES07/32	3.2/10×3.2g
Aureobasidin A （AbA）金擔(dān)子素A	60231ES03/08/10	1/5×1/10×1mg
Polymyxin B Sulfate 多粘菌素B硫酸鹽	60242ES03/10	1/10MU

 

參考文獻(xiàn)

[1] Vanessa Cerantola, et al. Aureobasidin A arrests growth of yeast cells through both ceramide intoxication and deprivation of essential inositolphosphorylceramides. Mol Microbiol. 2009 Mar;71(6):1523-37.

[2] Gong P, Song C, et al. Physalis floridana CRABS CLAW mediates neofunctionalization of GLOBOSA genes in carpel development. J Exp Bot. 2021 Oct 26;72(20):6882-6903.

[3] Su D, Xiang W, Wen L, et al. Genome-wide identification, characterization and expression analysis of BES1 gene family in tomato. BMC Plant Biol. 2021;21(1):161.

[4] Dong H, Tan J, Li M, Yu Y, Jia S, Zhang C, Wu Y, Liu Y. Transcriptome analysis of soybean WRKY TFs in response to Peronospora manshurica infection. Genomics. 2019 Dec;111(6):1412-1422. doi: 10.1016/j.ygeno.2018.09.014. Epub 2018 Sep 27. PMID: 30267765.

 

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