細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，是指在一定的生理或者病理?xiàng)l件下，細(xì)胞主動的、高度有序的、自己結(jié)束其生命的過程。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。凋亡過程中伴隨著細(xì)胞膜、蛋白、DNA等各種變化，可通過各種手段檢測，具體介紹如下圖所示：

圖1. 細(xì)胞凋亡歷程

目前市場上出現(xiàn)多種細(xì)胞凋亡周期檢測試劑盒，國外品牌仍占據(jù)著該領(lǐng)域的半壁江山，但價格昂貴、規(guī)格小、物流慢，一定程度上限制科研進(jìn)程。為了打破這種局面，在國家大力扶持自主品牌的政策下，多家企業(yè)投入研究，研發(fā)出大量價格低廉、性質(zhì)穩(wěn)定的細(xì)胞凋亡周期檢測產(chǎn)品，提高了相關(guān)科研、檢測實(shí)驗(yàn)室的效率，降低相應(yīng)成本。

翌圣生物科技(上海)股份有限公司就是凋亡檢測試劑盒生產(chǎn)廠家之一。不僅長期生產(chǎn)多種高效穩(wěn)定、價格低廉、適用范圍廣的凋亡檢測試劑盒，且整理出一整套完美檢測細(xì)胞凋亡的方法，實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞從凋亡早期到晚期的實(shí)時監(jiān)測。下面，就讓我們從問題出發(fā)，解讀細(xì)胞凋亡的全過程。

 

如何檢測早期凋亡？

在細(xì)胞凋亡早期階段，細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（PS）從胞質(zhì)轉(zhuǎn)至胞外，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中，細(xì)胞膜通透性增加，從而被PS特異的Annexin-V探針標(biāo)記。目前YEASEN公司提供的Annexin-V細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，可適用于早期凋亡檢測。Annexin-V為Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，對PS有極強(qiáng)的結(jié)合力。另外，本試劑盒中還提供了PI/7-AAD進(jìn)行雙染色，由于正常細(xì)胞不會被染色，凋亡早期細(xì)胞可被標(biāo)記上Annexin-V，壞死或凋亡晚期細(xì)胞被PI/7-AAD染色，因此各階段的細(xì)胞明顯區(qū)分開來。

圖2. Annexin-V實(shí)驗(yàn)原理

 

 

 

性能展示

 

 

1.不同熒光基團(tuán)標(biāo)記Annexin-V探針，可實(shí)現(xiàn)多重染色

包括PE、FITC、Alexa Fluor 488等標(biāo)記Annexin-V，靶向細(xì)胞外翻的PS，在不同的激發(fā)和發(fā)射通道下，發(fā)出綠色、紅色不同顏色的熒光信號，可與細(xì)胞核等探針聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞多重染色。

圖3a. Annexin-V-Fluor647 (紅色)染色細(xì)胞，來源：參考文獻(xiàn)

圖3b. Annexin-V-FITC (綠色)染色細(xì)胞，來源：參考文獻(xiàn)

2.Annexin-V探針靈敏度高、特異性強(qiáng)

納摩爾濃度水平、可高選擇性地識別和標(biāo)記凋亡早期外翻的PS，不會標(biāo)記其他DNA、RNA，檢測出極少量的凋亡細(xì)胞。

3.背景干擾少、穩(wěn)定性強(qiáng)

不會出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。

4.翌圣Annexin-V探針與進(jìn)口產(chǎn)品比較，價格低廉

相同規(guī)格條件，比較翌圣與T*進(jìn)口Annexin-V探針價格差異。

圖4. YEASEN和T*進(jìn)口的Annexin-FITC產(chǎn)品價格對比圖（規(guī)格：50 T）

除此之外，細(xì)胞凋亡早期，線粒體跨膜電位的下降，導(dǎo)致膜穿透性改變。JC-1染料可以檢測線粒體跨膜電位的變化，正常線粒體內(nèi)，JC-1發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光。凋亡早期的線粒體內(nèi)，由于膜電位的下降或喪失，JC-1產(chǎn)生綠色熒光。通過其熒光的增強(qiáng)或減弱可反應(yīng)線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。
 

如何檢測晚期凋亡？

細(xì)胞凋亡晚期，染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標(biāo)記的dUTP結(jié)合到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法就是TUNEL法。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。目前YEASEN公司提供的TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒，可適用于晚期凋亡檢測。

 

圖5. TUNEL實(shí)驗(yàn)原理
 

 

 

性能展示

 

 

1.TUNEL探針可檢測石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞不同樣本

不同熒光顏色TUNEL試劑盒，可標(biāo)記細(xì)胞、爬片、石蠟切片等不同樣本，發(fā)射不同熒光信號。

圖6a. TUNEL-FITC檢測細(xì)胞樣本,來源：參考文獻(xiàn)

 

圖6b. TUNEL-Alex488檢測石蠟切片,來源：參考文獻(xiàn)

圖6c. TUNEL-Alex640檢測細(xì)胞爬片,來源：參考文獻(xiàn)

2.靶向特定的凋亡晚期中的DNA，具有高選擇性和高靈敏度

納摩爾濃度水平的TUNEL探針，高選擇性地靶向和標(biāo)記晚期凋亡細(xì)胞的片段化DNA的粘性3'-OH末端，發(fā)出強(qiáng)烈熒光信號，可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞。

3.檢測多樣性

流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦、酶標(biāo)儀等儀器均可以檢測熒光信號。

圖7. 不同儀器檢測TUNEL熒光信號值

4.背景干擾少、穩(wěn)定性強(qiáng)

不會出現(xiàn)其他熒光顏色背景，染色清晰；且批次間性能穩(wěn)定。

5.翌圣TUNEL探針與進(jìn)口產(chǎn)品比較，價格低廉

相同規(guī)格條件，比較翌圣與T*進(jìn)口TUNEL-FITC探針價格差異。

圖8. YEASEN和T*進(jìn)口的TUNEL-FITC產(chǎn)品價格對比圖（規(guī)格：50 T）

 

產(chǎn)品選擇指南

目前翌圣擁有10余種早期凋亡和晚期凋亡檢測試劑盒，各具特色，能夠完全滿足用戶各種需求。

 

 

訂購信息

 

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號	規(guī)格
Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit	40302ES/20/50/60	20/50/100 T
Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit	40310ES20/50/60	20/50/100 T
Kit JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Assay	40706ES60	100 T
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（FITC）TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)	40306ES20/50/60	20/50/100 T

HB20200409