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《免封閉PAGE凝膠快速制備操作小視頻》,見右側(cè)
目前翌圣開發(fā)的PAGE凝膠制備試劑盒,凝膠的速度上相比較傳統(tǒng)的方法更加迅速,以及受到外界環(huán)境溫度的影響,也導(dǎo)致凝膠的速度變快。此時(shí),可有效控制促凝劑過硫酸銨的用量(比如減半使用)來更好的解決凝膠過快帶來的來不及灌膠問題。再次,不推薦一次性的制備過多的膠板,2-3塊為最優(yōu),當(dāng)然,制膠比較熟練的客戶可以制備多的膠板。
翌圣開發(fā)的PAGE凝膠試劑盒,分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中存在SDS變性劑成分,如果在混勻緩沖液的過程中移液槍吹吸過快以及晃動(dòng)太激烈,都會(huì)出現(xiàn)太多的氣泡,如果等待氣泡消失,可能此時(shí)配膠杯中的凝膠已經(jīng)凝固。因此,加入促凝劑之后僅需緩慢的晃動(dòng)配膠杯即可,無需劇烈混勻。
這主要出現(xiàn)在初學(xué)者中,如果可用緩沖液將膠與膠板之間的氣泡沖走,一般對(duì)電泳不會(huì)有太大的影響。上述問題前者主要原因是拔梳子用力不均勻或過猛所致;后者是由于在解除制膠的夾子后,板未壓緊而致空氣進(jìn)入引起的。
1)本試劑盒制備的凝膠,切勿暴漏在空氣中太久,盡量在配置20分鐘左右進(jìn)行使用;
2)拔梳子時(shí),需要先將凝膠浸泡在電泳緩沖液中,并快速的將梳子拔出,切勿拉扯,以至凝膠變形。
2) 改良型過硫酸銨APS的加量不合適,加量相對(duì)較多,凝膠凝固過快也會(huì)膠不平。
3) 混合試劑時(shí)沒有很好的搖勻,導(dǎo)致有些部位的聚合劑濃度過高,聚合相對(duì)較快造成膠不平;
4) 溫度也是影響膠聚合的重要因素,可能為了讓膠更快的凝固而把膠放到 50 度的溫箱,由于受熱不均勻,也會(huì)造成膠聚合不均勻。
特別提示:免封閉PAGE凝膠注意事項(xiàng)
1)免封閉PAGE凝膠配置手發(fā)需要更加熟練,配置完分離膠后,需要同時(shí)灌注濃縮膠,利用兩者的重力效應(yīng),將分離膠壓平。
2)插入膠梳時(shí)需要小心,如果過快,可能會(huì)導(dǎo)致垂直的沖擊力,導(dǎo)致上下層膠發(fā)生混合。
3)如果上層膠來不及添加,免封閉膠也可進(jìn)行封閉(即用乙醇進(jìn)行封平)。
因?yàn)槭敲夥忾]的,下面分離膠沒有凝固好,如果用力較大或者速度較快容易把分離膠沖開導(dǎo)致濃縮膠和分離膠混合,加濃縮膠時(shí)需要緩慢的加入膠板之中,濃縮膠加到一層之后可移動(dòng)槍頭進(jìn)行加液,此時(shí)速度也要慢。在插入梳子時(shí),要輕柔一些,防止液體流動(dòng)過于劇烈。
3、免封閉PAGE凝膠超快速制備試劑盒制備的凝膠放在轉(zhuǎn)膜液中,體積有稍許變大?
丙烯酰胺凝膠屬于水凝膠,這是水凝膠的溶脹現(xiàn)象,水凝膠會(huì)吸收周圍的水分,凝膠密度越大,就越容易吸收,而免封閉,分離膠的密度于普通款相比密度更大,所以溶脹更明顯一些,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。