PART 01
背景簡(jiǎn)介
1998年，Handelsman等人提出宏基因組學(xué)這概念，它是一種以環(huán)境樣品中的微生物群體基因組為研究對(duì)象，以功能基因篩選和/或測(cè)序分析為研究手段，以微生物多樣性、種群結(jié)構(gòu)、進(jìn)化關(guān)系、功能活性、相互協(xié)作關(guān)系及與環(huán)境之間的關(guān)系為研究目的的新的微生物研究方法。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，宏基因組學(xué)的研究也掀起了一波熱潮，應(yīng)用范圍十分廣泛，例如環(huán)境檢測(cè)、水質(zhì)檢測(cè)、挖掘功能菌株、腸道菌群檢測(cè)、新藥開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域。
糞便是人或動(dòng)物的大腸排遺物。糞便的四分之一是水分，其余大多是蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)物、脂肪、未消化的食物纖維、脫了水的消化液殘余、以及從腸道脫落的細(xì)胞和死掉的細(xì)菌等。一般來(lái)說(shuō)，只需提取其中細(xì)菌的核酸進(jìn)行研究，剩余的食物纖維、蛋白質(zhì)等均會(huì)對(duì)提取造成干擾，其中食物纖維會(huì)增加裂解難度，蛋白質(zhì)會(huì)降低核酸的純度，影響下游研究的開(kāi)展。
為解決這些難題，翌圣研發(fā)了一款糞便DNA提取試劑盒--- MolPure® Stool DNA Kit，能高效獲得優(yōu)質(zhì)的糞便DNA，有利于后續(xù)對(duì)腸道微生物的研究。
PART 02
產(chǎn)品介紹
MolPure® Stool DNA Kit 適用于各類(lèi)糞便樣本的基因組DNA提取。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為特有新型材料，配合獨(dú)特的緩沖液配方可有效去除動(dòng)物糞便中各種影響下游實(shí)驗(yàn)的抑制因子,并能高效地回收糞便中的基因組DNA。提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)，如酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建等。
1
產(chǎn)品特點(diǎn)
» 純度高：無(wú)有機(jī)提取或乙醇沉淀，下游應(yīng)用不受抑制。
» 提取產(chǎn)量高：從糞便中純化最多30 μg基因組、細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)DNA。
» 操作簡(jiǎn)便、快速：可以在1 h內(nèi)完成提取操作。
» 提取產(chǎn)量高：從糞便中純化最多30 μg基因組、細(xì)菌、病毒和寄生蟲(chóng)DNA。
» 操作簡(jiǎn)便、快速：可以在1 h內(nèi)完成提取操作。
2
應(yīng)用案例
MolPure® Stool DNA Kit提取糞便DNA完整度好、產(chǎn)量高。分別稱(chēng)取6份200 mg小鼠糞便樣本,使用MolPure® Stool DNA Kit和O品牌、T品牌同類(lèi)產(chǎn)品提取基因組DNA，50 μL ddH2O洗脫。并取等體積量的DNA，跑膠鑒定基因組完整度和條帶亮度。
圖1. 瓊脂糖電泳判定提取的基因組產(chǎn)量。Y為翌圣品牌，O*為進(jìn)口品牌，T為國(guó)產(chǎn)品牌。翌圣品牌提取產(chǎn)量高，DNA完整性更好。
PART 03
F A Q
糞便樣品中僅含有一小部分脫落的消化道細(xì)胞，消化脫落細(xì)胞的基因組DNA，約占總DNA的0.01%。大部分DNA為細(xì)菌DNA和食物源DNA。
Q:
目前較好的保存方法是糞便與干燥硅豆混合保存，或是在DMSO / EDTA/ Tris鹽溶液中保存，可以有效減緩DNA的降解。
Q:
糞便樣品中大部分的DNA來(lái)自于細(xì)菌和食物。糞便中細(xì)菌的含量較別大，因此，糞便DNA的含量差別非常大，一般為200 ng-20 μg不等。
Q:
糞便樣品中含有多種微生物，其多聚糖、植物多糖、膽酸、 膽鹽、膽色素、消化液、粘液等均會(huì)對(duì)Taq酶等的活性產(chǎn)生影響，而影響到糞便DNA的下游檢測(cè)。
Q:
由于糞便會(huì)不同程度的暴露在環(huán)境中，因而易于受到外源遺傳物質(zhì)的污染，在糞便DNA的提取以及PCR擴(kuò)增過(guò)程中，污染已經(jīng)成為影響研究結(jié)果的重要因素。因而在DNA提取及PCR擴(kuò)增過(guò)程中，所有步驟進(jìn)行空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)是必要的，另外，在糞便樣品收集、保存以及提取過(guò)程中，采用嚴(yán)格的消毒措施也可以有效減少污染的機(jī)會(huì)。
Q:
由于糞便樣品中含有大量的PCR等抑制因子，如果純化過(guò)程沒(méi)有將其去除掉，會(huì)影響到特異性片段的擴(kuò)增。但是模板添加量也是個(gè)關(guān)鍵性問(wèn)題，雖說(shuō)PCR檢測(cè)對(duì)其模板是非常靈敏的，但也是有其正常的檢測(cè)域，一般要在100 ng以上，而糞便樣品含有的核DNA非常少，在純化過(guò)程中產(chǎn)量不高的話，會(huì)由于模板添加量在其正常檢測(cè)域之外而導(dǎo)致無(wú)法擴(kuò)增出特異性片段。
PART 04
訂購(gòu)信息
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產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品編碼 |
規(guī)格 |
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18820ES50 |
50T |
PART 05
相關(guān)產(chǎn)品
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實(shí)驗(yàn)類(lèi)型 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品編碼 |
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PCR實(shí)驗(yàn) |
10148ES60/76 |
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10149ES03/08 |
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電泳實(shí)驗(yàn) |
10202ES76 |
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qPCR實(shí)驗(yàn) |
11184ES08 |
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克隆實(shí)驗(yàn) |
10911ES20 |
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10912ES10 |
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11802ES80/92 |
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NGS實(shí)驗(yàn) |
12204ES08/24/96 |
HB210927
