潮霉素B的作用原理
潮霉素B（Hygromycin B）是一種氨基糖苷類抗生素，由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生，通過破壞易位和促進80S核糖體的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。
目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
潮霉素B的應用
● 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉染Hph+載體的原核或真核細胞（植物細胞和哺乳動物細胞）
大腸桿菌(Escherichia coli.)來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。
● 由于作用模式的差異，潮霉素B常與遺傳霉素G418，博來霉素和殺稻瘟菌素s聯(lián)合使用，篩選穩(wěn)定轉染兩個不同載體的細胞株
它的作用模式與G418 (Cat#60220ES)、博來霉素(Cat#60257ES)和殺稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同，所以非常適合在雙選實驗中與另一種選擇性抗生素聯(lián)合使用。
● 抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑制翻譯的功效
● 作為驅蟲藥加入動物飼料中，飼養(yǎng)動物
● 潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve)，即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動物細胞50-500 μg/mL；細菌/植物細胞20-200 μg/mL；真菌200-1000 μg/mL。
潮霉素B的實驗步驟
● 鋪板：細胞培養(yǎng)至80-90%融合時，棄掉培養(yǎng)基，用1-2 mL PBS洗滌細胞兩次，加入1mL Trypsin-EDTA溶液，充分洗滌細胞后，加入適量的胰蛋白酶消化液，將培養(yǎng)皿于37ºC放置數(shù)分鐘使其在鏡下大部分變圓即可終止消化，鋪板密度約30%左右于5% CO2 37ºC 過夜培養(yǎng)。
● 根據(jù)細胞類型，設定合適的濃度梯度。如哺乳動物細胞，可設定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根據(jù)儲存液的濃度進行對應的稀釋操作。
● 維持Hygromycin B 濃度，隔天換液，鏡下觀察。7 天后，選擇能將未轉化的細胞完全殺死的最低Hygromycin B 濃度，為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。
化學性質
潮霉素B是類白色至微黃褐色粉末，有特殊氣味，為弱堿，易溶于水、甲醇、乙醇等，易與許多有機酸和無機酸生成鹽。
保存方法
溶液直接存放在2℃～8℃，可存放6個月以上。
注意事項
● 攜帶hph基因轉染的細胞對潮霉素有抗性，轉染細胞穩(wěn)定或暫時表達該基因。
● 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
產(chǎn)品推薦
翌圣生物的潮霉素B提供兩種狀態(tài)的產(chǎn)品，粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL)，貨號分別為60225ES、60224ES。
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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60224ES03 |
1 g (20 mL) |
849.00 |
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60224ES10 |
10×1 g (20 mL) |
7396.00 |
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| Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES03 | 1 g | 719.00 |
| 60225ES10 | 10 g | 6599.00 |
客戶使用該產(chǎn)品發(fā)表的科研文獻（不完全統(tǒng)計：部分）
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