產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Geneticin)，Zeocin和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
產(chǎn)品信息
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貨號 |
60225ES03 / 60225ES10 |
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規(guī)格 |
1 g /10 g |
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CAS號（CAS NO.） |
31282-04-9 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C20H37N3O13 |
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分子量（Molecular Weight） |
527.52 g/mol |
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純度（Purity） |
＞90% by HPLC |
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外觀（Appearance） |
固體粉末 |
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溶解性（Solubility） |
易溶于水 |
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活力（Potency） |
≥1050 U/mg |
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結(jié)構(gòu)（Structure） |
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組分信息
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組分名稱 |
60225ES03 |
60225ES10 |
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規(guī)格 |
1 g |
10 g |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。
使用說明
1. 儲存液的配制（50 mg/mL）
稱取0.5 g 潮霉素B加入10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用0.22 μm濾器過濾除菌，分裝成單次使用的小量（如1 mL）放到-25~-15℃凍存，1年穩(wěn)定。
2. 常用篩選濃度
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型、培養(yǎng)基、生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200 μg/mL；真菌300-1000 μg/mL。
3. 殺滅曲線的建立
為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜?！咀ⅰ浚簩τ谛枰呙芏葋頇z測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/mL，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
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終濃度（μg/mL） |
培養(yǎng)基體積（mL） |
5 mg/mL潮霉素B加入體積（mL） |
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50 |
9.9 |
0.1 |
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100 |
9.8 |
0.2 |
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250 |
9.5 |
0.5 |
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500 |
9.0 |
1.0 |
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750 |
8.5 |
1.5 |
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1000 |
8.0 |
2.0 |
3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4）接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1）轉(zhuǎn)染48 h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）?！咀ⅰ浚杭?xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果最好。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3）篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項(xiàng)
1. 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.外，還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅用于科研用途，禁止用于人身上。
產(chǎn)品應(yīng)用場景和主要特點(diǎn)
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應(yīng)用場景 |
名稱 |
貨號 |
主要特點(diǎn) |
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原生質(zhì)體制備 |
10404ES |
來源于蝸牛的混合酶，可降解植物細(xì)胞壁。 |
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生長調(diào)節(jié)劑 (生長促進(jìn)劑 生長延緩劑 新型植物激素） |
41001ES |
從幼嫩的玉米芯中發(fā)現(xiàn)分離出來的，促進(jìn)側(cè)芽生長，刺激細(xì)胞分化，促進(jìn)愈傷組織和種子發(fā)芽，還能防止葉片衰老。 |
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41002ES |
高純的反式玉米素，適用于植物組織培養(yǎng)。 |
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41003ES |
是一種活性高且應(yīng)用廣泛的天然合成細(xì)胞分裂素，功能上不僅促進(jìn)細(xì)胞分裂，刺激莖芽增殖，抑制根的生成，阻止葉片衰老，還能激活基因表達(dá)和代謝活性。 |
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40509ES |
適用于植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)。 |
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41004ES |
抑制幼苗生長。 |
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41012ES |
近年來發(fā)現(xiàn)的一種植物激素或其前體，能夠抑制植物的分枝和側(cè)芽的生長。 |
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抗生素 (抗細(xì)菌 抗真菌 抗性篩選）
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60230ES |
特美汀對革蘭陽性菌、陰性菌、需氧及厭氧菌的抗菌范圍甚廣。 |
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60214ES |
實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用非常普遍：微生物學(xué)研究，細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制細(xì)菌污染，分子生物學(xué)研究 |
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60208ES |
主要對革蘭氏陽性菌有效，作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，對人類的毒性較小。 |
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60162ES |
有效抑制多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長，從而有效控制細(xì)胞被細(xì)菌污染。 |
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60234ES |
有效的廣譜抗菌抗生素。 |
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60206ES |
對革蘭氏陽性菌和陰性菌及支原體都有抑制作用。 |
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60231ES |
一種環(huán)狀肽、抗真菌的抗生素，具有很強(qiáng)的抗真菌能力，主要抗酵母菌。 |
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60225ES |
用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。 |
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60220ES |
將抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選攜帶抗性基因的細(xì)胞。 |
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除草劑 |
41011ES |
對多年生的惡習(xí)性雜草如茅草、香附子、狗牙根有很好的防除效果。 |
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60221ES |
毒性低，活性高，廣譜的非選擇性除草劑，其有效成分是草丁膦。 |
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60235ES |
用于篩選含有抗性基因的基因工程細(xì)胞系，且在玉米培養(yǎng)中比草銨膦的活性強(qiáng)。 |
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60216ES |
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60217ES |
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60218ES |
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60219ES |
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60220ES |
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60225ES |
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60228ES |
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60230ES |
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60231ES |
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60242ES |
