離子交換層析(ion-exchange chromatography,IEC) 是在生物大分子（如蛋白、抗體、多糖、核酸）純化中得到最廣泛應用的方法之一，它是根據(jù)樣品的帶電性質(zhì)進行分離的技術(shù)。
離子交換層析可以根據(jù)配基的不同可以分為陽離子交換層析和陰離子交換層析。陽離子交換柱可以吸附帶正電荷的蛋白，陰離子交換柱可以吸附帶負電荷的蛋白。目前常用的配基有以下4種：
離子交換基團的類型決定了介質(zhì)的選擇性，基架決定了介質(zhì)的分辨率和機械性能，根據(jù)基架的化學成份分為以下幾類。
粒徑越小，填料分辨率越高，反壓會越高，流速和通量會下降
01
Agarose 6FF填料（快速捕獲、初步純化）
高交聯(lián)瓊脂糖基架，粒徑90μm。高流速的性能使該填料易于放大。此系列可替代cytiva的Sepharose Fast Flow系列產(chǎn)品。
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產(chǎn)品名稱 |
編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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20540ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
300/788/3600 |
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20547ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
300/788/3600 |
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20550ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
300/788/3600 |
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20553ES25/60/76 |
25mL/100mL/500mL |
300/788/3600 |
02
Agarose HP填料（中度純化，高分辨率）
高交聯(lián)瓊脂糖基架，粒徑34μm。由于具有較小的粒徑，使用該填料可以獲得更高的分辨率，峰展寬更窄，樣品的純度更高。此系列可替代cytiva的Sepharose High Performance系列產(chǎn)品用于中度純化以及精細純化。
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產(chǎn)品名稱 |
編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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20460ES25/60 |
25mL/100mL |
400/1000 |
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20463ES25/60 |
25mL/100mL |
400/1000 |
03
Magnify填料（高流速、高載量）
Magnify填料使用高流速瓊脂糖基架，90μm粒徑，在速度，載量和流通量方面都有較大的提升。在低背壓，高流速的情況下，仍然具有較高的動態(tài)載量，使循環(huán)的次數(shù)減少，極大的提高的能效。填料具有線性葡聚糖延展臂，擁有比Agarose高出近一倍的動態(tài)載量，所需的保留時間也大大縮短。此系列可替代cytiva的Capto系列產(chǎn)品用于捕獲階段和中度純化階段。
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產(chǎn)品名稱 |
編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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20466ES25/60 |
25mL/100mL |
1400/2800 |
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20468ES25/60 |
25mL/100mL |
1400/2800 |
04
Magnify HP填料（高流速、高分辨率）
Magnify HP填料利用了Magnify基架，并作為40μm小粒徑產(chǎn)品提供更高的分辨率。高流速瓊脂糖基架提供了高流速，高動態(tài)載量以及低背壓等特性，較小的粒徑使產(chǎn)品在高流速的同時提供高分辨率，此系列可替代cytiva的Capto ImpRes系列產(chǎn)品用于中度純化以及精細純化。
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產(chǎn)品名稱 |
編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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20470ES25/60 |
25mL/100mL |
1500/3000 |
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20472ES25/60 |
25mL/100mL |
1500/3000 |
常見問題
01 選陽離子還是陰離子？
當緩沖液的PH值低于蛋白等電點PI，蛋白帶正電，選陽離子交換柱；當緩沖液的PH值高于蛋白等電點PI，蛋白帶負電，選陰離子交換柱。
02
強和弱的區(qū)別？
強離子交換劑載量在很寬的PH范圍內(nèi)保持恒定，弱離子交換劑載量會隨著PH而變化。首選強離子交換劑，當選擇性不夠好時，嘗試弱離子交換劑。
03
如何選擇緩沖液？
如果目的蛋白不是嗜酸或嗜堿性蛋白，建議盡量選擇PH6-8的中性緩沖液。開始可以嘗試使用和等電點相差1個PH的緩沖液，如果要達到最好分離效果，一般需要摸索PH條件。
04
如果不知道蛋白等電點？
大部分蛋白等電點低于7，可以使用Q柱先做嘗試，使用PH接近PH7的緩沖液。如果不合適再選擇其他SP柱或其他柱子。
05
初次實驗標準條件？
Start buffer A：20-50 mMElution buffer B：20-50 mM + 1M NaCl，然后調(diào)節(jié)PH使其與Start buffer A的PH一致
06
樣品不結(jié)合？
1. 樣品鹽濃度太高；
2. 優(yōu)化PH；
3. buffer是否含有帶電物質(zhì)（如去垢劑）；
4. 柱效下降，CIP清洗
07
結(jié)合洗不下來？
1. 增加洗脫液鹽濃度；
2. 蛋白穩(wěn)定性不好，已在柱上變性沉淀；
3. 優(yōu)化PH值
08
純度不夠
1. 線性梯度洗脫；
2. 優(yōu)化buffer條件；
3. 使用更高分辨率產(chǎn)品；
4. 增加分子篩，疏水等多步純化
產(chǎn)品測試
測試一
填料：5 mL SP Agarose 6FF
樣品：發(fā)酵液上清(蛋白PI=4.78)，電導<5ms/cm
樣品加載：15mg
起始緩沖液A：20mM醋酸鈉PH3.5
洗脫緩沖液B：20mM醋酸鈉+1M NaCl PH3.5
流速：3mL/min
梯度：100mM,200mM,300mM,400mM,500mM,1 M
圖1.SP Agarose 6FF層析圖譜
測試二
填料：5 mL Q柱
樣品：發(fā)酵液上清pH4.88，電導24.6ms/cm，
樣品加載：100mL
起始緩沖液A：TE PH6.0
洗脫緩沖液B：TE+1M NaCl PH 6.0
流速：3mL/min
梯度：100mM,200mM,300mM,400mM,500mM,1 M,2M
圖2.Q Agarose HP層析圖譜
相關(guān)產(chǎn)品
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系列名稱 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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Agarose 6FF |
DEAE 6FF Chromatography Column, 1 mL(DEAE 6FF弱陰離子交換預裝柱，1 mL) |
20541ES03 |
1 mL |
246 |
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DEAE 6FF Chromatography Column, 5 mL（DEAE 6FF弱陰離子交換預裝柱，5 mL） |
20542ES08 |
5 mL |
618 |
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20548ES03 |
1 mL |
246 |
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20549ES08 |
5 mL |
618 |
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20551ES03 |
1 mL |
246 |
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20552ES08 |
5 mL |
618 |
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20554ES03 |
1 mL |
246 |
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20555ES08 |
5 mL |
618 |
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Agarose HP |
20461ES03 |
1 mL |
360 |
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20462ES08 |
5 mL |
688 |
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20464ES03 |
1 mL |
360 |
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20465ES08 |
5 mL |
688 |
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Magnify |
Magnify Q Chromatography Column, 5 mL（Magnify Q強陰離子交換預裝柱，5 mL） |
20467ES08 |
5 mL |
718 |
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Magnify SP Chromatography Column, 5 mL(Magnify SP強陽離子交換預裝柱，5 mL) |
20469ES08 |
5 mL |
718 |
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Magnify HP |
Magnify Q HP Chromatography Column, 5 mL（Magnify Q HP強陰離子交換預裝柱，5 mL） |
20471ES08 |
5 mL |
899 |
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Magnify SP HP Chromatography Column, 5 mL(Magnify SP HP強陽離子交換預裝柱，5 mL) |
20473ES08 |
5 mL |
899 |
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