單點(diǎn)/多點(diǎn)定點(diǎn)突變隨心變—想變哪里變哪里
定點(diǎn)突變技術(shù)是利用PCR等技術(shù)定向改變基因的特定堿基序列，是研究基因功能和蛋白功能的一種非常有用的手段。通過(guò)該技術(shù)，可迅速，高效提高DNA所表達(dá)的目的蛋白的性狀及表征，從而來(lái)闡明目的基因的調(diào)控機(jī)理，以及下游實(shí)驗(yàn)中的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。
翌圣生物推出的定點(diǎn)突變?cè)噭┖谢?/span>Hieff Clone® 快速克隆技術(shù)的定點(diǎn)突變系統(tǒng)，目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)DpnI消化、Hieff Clone®重組環(huán)化后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)化即可完成定點(diǎn)突變。高效快速的實(shí)現(xiàn)直接對(duì)目標(biāo)質(zhì)粒中的靶位點(diǎn)進(jìn)行單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，以及插入或缺失等。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
» 應(yīng)用范圍廣：可進(jìn)行單點(diǎn)，多點(diǎn)突變
» 擴(kuò)增性能優(yōu)越：超高保真酶可擴(kuò)增長(zhǎng)度小于20kb的任何質(zhì)粒
» 高效DpnI酶：可充分有效降解未突變的質(zhì)粒模板
操作流程
» 引物設(shè)計(jì)與目標(biāo)質(zhì)粒擴(kuò)增
反向PCR引物中需引入同源臂和突變位點(diǎn)。
» DpnI 消化質(zhì)粒模板
質(zhì)粒模板來(lái)源于大腸桿菌，為dam甲基化修飾，對(duì)DpnI敏感而被切碎。反向PCR合成的帶突變位點(diǎn)的線性化質(zhì)粒因沒(méi)有甲基化而不被切開(kāi)。
» 重組反應(yīng)
同源臂在重組酶的作用下進(jìn)行重組。
圖1. 進(jìn)行單堿基（或多堿基）定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)流程
部分發(fā)表文獻(xiàn)
[1]. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017.（IF37.205）
[2]. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019.（IF31.398）
[3]. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. （IF31.398）
[4]. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158.（IF 20.46）
[5]. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7.（IF14.548）
[6]. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019.（IF14.548）
FAQ
Q1. 請(qǐng)問(wèn)單點(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是否都是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)引物？是否都包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失？堿基插入/缺失的最大長(zhǎng)度是多少?是否可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，氨基酸的數(shù)量限制是多少？
A1：?jiǎn)吸c(diǎn)突變/多點(diǎn)突變是每個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)一對(duì)引物；正反向引物可以包括堿基/氨基酸突變，堿基插入和缺失，也可以將這些放在一條引物上；堿基插入/缺失的最大長(zhǎng)度沒(méi)有限制，可為任何長(zhǎng)度；可以進(jìn)行連續(xù)氨基酸的突變，無(wú)特別數(shù)量限制。
Q2. 引物設(shè)計(jì)的原則是什么？有無(wú)官網(wǎng)的引物設(shè)計(jì)軟件，若沒(méi)有，推薦幾個(gè)好用的引物設(shè)計(jì)軟件。
A2：引物設(shè)計(jì)基本原則是使擴(kuò)增產(chǎn)物末端有同源序列即可。無(wú)官方設(shè)計(jì)軟件，推薦軟件Primer5，Vector NTI。
Q3. 本試劑盒可以進(jìn)行多點(diǎn)突變，能夠同時(shí)進(jìn)行幾個(gè)位點(diǎn)的突變? 突變效率如何?進(jìn)行單點(diǎn)突變的突變效率是多少？
A3：最高同時(shí)突變6個(gè)獨(dú)立位點(diǎn)（每個(gè)位點(diǎn)之間相距超過(guò)100bp）。突變效率非常高（單次反應(yīng)500多個(gè)克隆，陽(yáng)性率超過(guò)95%）。
Q4. 該kit不含有感受態(tài)細(xì)胞，推薦的感受態(tài)細(xì)胞是哪些？
A4：Top10、DH5α、JM109等常規(guī)感受態(tài)。
訂購(gòu)信息
|
應(yīng)用 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
|
單堿基、不連續(xù)雙堿基 |
Hieff Mut Site-Directed Mutagenesis Kit 定點(diǎn)突變?cè)噭┖?/a> |
11003ES10 |
10 T |
|
三至五個(gè)不連續(xù)位點(diǎn) （相距超過(guò)50bp） |
Hieff Mut Site-Directed Mutagenesis Kit 定點(diǎn)突變?cè)噭┖?/a> |
11004ES10 |
10 T |
相關(guān)產(chǎn)品
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
|
11802ES80 |
10×100 μL |
|
|
11802ES92 |
100×100 μL |
|
|
11801ES80 |
10×100 μL |
|
|
11801ES92 |
100×100 μL |
|
|
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell BL21 (DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 |
11804ES80 |
10×100 μL |
|
60203ES10 |
10 g |
|
|
60203ES60 |
100 g |
|
|
60205ES08 |
5 g |
|
|
60205ES25 |
25 g |
|
|
60205ES60 |
100 g |
|
|
60206ES10 |
10 g |
|
|
60206ES60 |
100 g |
|
|
10148ES10 |
10 U |
|
|
10148ES60 |
100 U |
|
|
10148ES76 |
500 U |
|
|
10148ES80 |
1000 U |
|
|
10149ES01 |
100 μL |
|
|
10149ES03 |
1 mL |
|
|
10149ES08 |
5×1 mL |
|
|
10106ES03 |
1 mL |
|
|
10106ES08 |
5×1 mL |
|
|
10102ES03 |
1 ml |
|
|
10102ES08 |
5×1 ml |
|
|
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） |
10202ES76 |
500 μL |
|
10208ES60 |
100 g |
|
|
10510ES60 |
100 T |
|
|
10510ES80 |
10*100 T |
HB210728
