——純度>90%，酶活>250U/μL，無內(nèi)毒素，無標(biāo)簽

1. 產(chǎn)品簡(jiǎn)介

全能核酸酶，又稱廣譜核酸酶，英文名稱Benzonase Nuclease，一種來源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然以及變性的核酸，將它們消化成3-8個(gè)堿基長(zhǎng)度的5-單磷酸寡核苷酸，且不具有堿基識(shí)別特異性。另外，全能核酸酶在非常廣泛的條件下（6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）都能保持很高的穩(wěn)定性和消化活力，非常適用于作為各類科學(xué)研究以及疫苗、蛋白、多糖類制藥工業(yè)的首選酶制劑，去除樣本或制品中的核酸殘留，提升樣本純度和制品生物功效。

圖1  全能核酸酶結(jié)構(gòu)圖

 

2. 產(chǎn)品應(yīng)用

1）用于除去生物制品中的DNA/RNA

美國FDA對(duì)治療用每劑量的生物制品的核酸含量要求為低于10 pg，國內(nèi)對(duì)此相應(yīng)的要求為低于100 pg。全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工業(yè)生物制品中核酸的去除，使生物制品的最終核酸含量符合要求，同時(shí)提高生物制品功效。

 

2）用于降低細(xì)胞破碎后的粘度

全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分離效果，使之易于過濾（尤其是超濾），利于下游層析純化操作。

圖2  細(xì)胞裂解液Benonase處理（A）和未處理（B）比較圖

 

3）用于細(xì)胞培養(yǎng)來源產(chǎn)物的純化過程

核酸很容易粘附在病毒樣顆粒（VLP）、病毒粒子、包涵體等細(xì)胞生成顆粒的表面，使顆粒大小或電荷發(fā)生改變，造成這些顆粒的聚集，如外周血單細(xì)胞（PBMC）存放過程中的結(jié)塊現(xiàn)象。全能核酸酶可有效降解核酸，避免核酸對(duì)細(xì)胞產(chǎn)物的影響以及純化效率，利于提高細(xì)胞產(chǎn)物純化效率。

 

4）用于生化分析樣品的制備

在ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程中，用全能核酸酶處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，并提高回收率。

圖3  小鼠腦核蛋白Benonase處理（A）和未處理（B）雙向電泳比較圖

3. 產(chǎn)品性質(zhì)

表1  產(chǎn)品性質(zhì)表

英文別名（English Synonym）		BenzNuclease; Universal Nuclease; Benzonase endonuclease
CAS號(hào)（CAS NO.）		9025-65-4
分子量（Molecular Weight）		27.9 kDa
來源（Source）		真核酵母表達(dá)
標(biāo)簽（Tag）		無標(biāo)簽
純度（Purity）		≥90%（SDS-PAGE）
酶活（Enzyme Activity）		≥250 U/μL
比活（Specific Activity）		≥1.0×106 U/mg蛋白
蛋白酶（Protease）		Undetected
內(nèi)毒素（Endotoxin）		Undetected（鱟試劑法）
最適pH（Optimum pH）		8.0（工作范圍pH 6-10）
最適溫度（Optimum Temperature）		37℃（工作范圍0-42℃）
輔助因子（Cofactor）		1-10 mM Mg2+
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer）		20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl，50%甘油
稀釋緩沖液（Dilution Buffer）		20 mM Tris-Cl pH8.0，2 mM MgCl2，2 mM NaCl
活性單位定義（Unit Definition）		在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

 

4. 產(chǎn)品使用

1）產(chǎn)品作用條件

全能核酸酶在非常廣泛的條件下，都能保持很高的穩(wěn)定性和消化活力。表1中列舉了全能核酸酶可發(fā)揮核酸消化作用的部分條件參數(shù)。除此之外，全能核酸酶還可耐受6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，0.4% Sodium deoxycholate。

表2 全能核酸酶作用條件

條件參數(shù)	最適條件	可作用條件
Mg2+	1-2 mM	1-10 mM
pH	8.0-9.2	6.0-10.0
Temp	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	>100 mM
β-Mercaptoethanol	0-100 mM	>100 mM
Monovalent cation（Na+，K+）	0-20 mM	0-150 mM
PO43-	0-10 mM	0-100 mM

注：1）最適條件為全能核酸酶釋放≥90%活力的條件，可作用條件為全能核酸酶釋放≥15%活力的條件；2）全能核酸酶活力定義為在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

2）產(chǎn)品酶活測(cè)定

一個(gè)酶活性單位（U）定義為：在37°C、pH 8.0的反應(yīng)條件下，30分鐘內(nèi)可將37 µg的底物DNA（鮭魚精DNA）消化成為寡核苷酸（相當(dāng)于使260 nm吸收值變化1.0）的Binuclease核酸酶的量。

根據(jù)測(cè)試，本產(chǎn)品酶活≥250 U/μL，比活≥1.0×106 U/mg蛋白。

3）產(chǎn)品運(yùn)輸、儲(chǔ)存及穩(wěn)定性

固體酶可室溫運(yùn)輸，建議儲(chǔ)存溫度低于4°C。液體酶宜冷藏運(yùn)輸，建議－20°C保存。

液體酶在-20°C條件下，有效期為1年。打開包裝使用后，如果在2-8°C環(huán)境下放置超過一周時(shí)間，建議過濾除菌，防止微生物污染。固體酶儲(chǔ)存有效期為3年，打開包裝后及時(shí)使用，避免受潮。

5. 價(jià)格對(duì)比

Yeasen致力于為您提供性價(jià)比高的產(chǎn)品。

圖4  Yeasen全能核酸酶價(jià)格優(yōu)勢(shì)（25 KU規(guī)格）

 

6. 文獻(xiàn)引用

[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.

[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.

[3] Kulkarni P S, Sahai A, Gunale B, et al. Development of a new purified vero cell rabies vaccine (Rabivax-S) at the serum institute of India Pvt Ltd[J]. Expert Review of Vaccines, 2017, 16(4): 303-311.

[4] Rai T S, Adams P D. Chapter Fourteen-ChIP-Sequencing to Map the Epigenome of Senescent Cells Using Benzonase Endonuclease[J]. Methods in enzymology, 2016, 574: 355-364.

[5] Yang Z, Li M, Chen W, et al. The smart solution for DNA removal in biopharmaceutical production by benzonase endonuclease[J]. Journal of Applied Virology, 2013, 2(1).

 

7. 常見問答

Q. 產(chǎn)品應(yīng)如何稀釋？

A：正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000-1:20000，其中時(shí)間、溫度、稀釋比例為影響反應(yīng)的正面因素。

 

Q. 產(chǎn)品能否可以減少用量？

A：如希望減少用量，可酌情提高反應(yīng)溫度或延長(zhǎng)時(shí)間。

 

Q. 使用該產(chǎn)品進(jìn)行消化反應(yīng)的抑制因子有哪些？

A：在含有以下物質(zhì)的體系中，全能核酸酶的活性會(huì)降低50%或以上：>150 mM一價(jià)陽離子，>100 mM磷酸鹽，>100 mM硫酸銨，>100 mM鹽酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。

 

Q. 怎樣滅活全能核酸酶？如何去除？

A：采用EDTA螯合金屬離子會(huì)可逆地抑制全能核酸酶活性，極端條件會(huì)造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等。全能核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產(chǎn)物中分離出去。

 

Q. 全能核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是否兼容？

A：全能核酸酶與不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物兼容。若含有EDTA且濃度>1 mM時(shí)，會(huì)抑制核酸酶活性，建議：如果必須加EDTA，按照2倍EDTA濃度補(bǔ)加Mg2+。

 

Q. 產(chǎn)品的用量是多少？

A：需要根據(jù)重懸菌體所需裂解液的體積來確定需要酶的量。若普通蛋白純化，則需要濃度為25 U/mL；核蛋白則需要100 U/mL；病毒表達(dá)蛋白純化需要濃度為12.5 U/mL；疫苗產(chǎn)品需要量為0.9-1.1 U/mL。

 

Q. 產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何，如果不小心在室溫放置幾天后，酶活性會(huì)受到怎樣的影響？

A：室溫2-3天，對(duì)活力影響不大。

 

Q. 全能核酸酶能在尿素環(huán)境消化核酸嗎？

A：全能核酸酶在尿素濃度為6 M時(shí)活性先增加，隨著時(shí)間延長(zhǎng)活性又有降低；在尿素為7 M時(shí)，全能核酸酶15分鐘后出現(xiàn)變性并失活。但是在酶失活前多數(shù)核酸已經(jīng)降解了?？赏ㄟ^提高全能核酸酶使用濃度補(bǔ)償7 M尿素的影響。

 

8. 訂購信息

產(chǎn)品	貨號(hào)	規(guī)格	價(jià)格（元）
Benzonase Nuclease（Endotoxin-free）全能核酸酶	20125ES25	25 KU	1125.00
	20125ES50	50 KU	1965.00
	20125ES60	100 KU	3245.00
Benzonase   Nuclease全能核酸酶	20156ES25	25 KU	418.00
	20156ES50	50 KU	768.00
	20156ES60	100 KU	1398.00

 

9.相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品	貨號(hào)	規(guī)格	價(jià)格（元）
RIPA Lysis Buffer (Strong)   RIPA裂解液（強(qiáng)）	20101ES60	100 mL	228.00
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中）	20115ES60	100 mL	228.00
RIPA Lysis   Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）	20114ES60	100 mL	228.00
RNase A (10 mg/ml) 核糖核酸酶A（10 mg/mL）	10405ES03	1 mL	80.00
RNase A (100 mg/ml) 核糖核酸酶A（100 mg/mL）	10406ES03	1 mL	680.00
Deoxyribonuclease I (DNase I) from   bovine pancreas 脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺	10607ES15	15 KU	426.00
	10607ES81	10*15 KU	3126.00
	10608ES25	25 mg	336.00
	10608ES60	100 mg	686.00
	10608ES80	1 g	2866.00
Ribonuclease A (RNase A) from bovine   pancreas 核糖核酸酶A，來源于牛胰腺	10407ES60	100 mg	386.00
	10407ES80	1 g	1646.00