隨著Multi-CUT&Tag試劑盒的推出，越來越多科研工作者咨詢Multi-CUT&Tag的一些相關(guān)問題，今天，我們來對Multi-CUT&Tag技術(shù)原理進(jìn)行最全解析。
Multi-CUT&Tag實(shí)驗(yàn)流程及原理
實(shí)驗(yàn)原理：利用ConA磁珠捕獲細(xì)胞并利用5% Digitonin對細(xì)胞膜進(jìn)行穿孔，選擇鼠源一抗和兔源一抗實(shí)現(xiàn)同一細(xì)胞雙靶標(biāo)研究，之后，鼠源一抗結(jié)合Anti-mouse Tn5、兔源一抗結(jié)合Anti-rabbit Tn5從而定向切割不同靶標(biāo)靶向的目標(biāo)蛋白結(jié)合DNA序列，再經(jīng)過PCR完成二代測序文庫的構(gòu)建。對文庫進(jìn)行測序后的數(shù)據(jù)進(jìn)行barcode拆分，即可獲得雙靶標(biāo)的高分辨率靶蛋白結(jié)合的染色質(zhì)圖譜。
圖：Multi-CUT&Tag實(shí)驗(yàn)流程
Multi-CUT&Tag試劑盒為即用型試劑盒，試劑盒中含有Box I和Box II，存放溫度不一致。試劑盒中，包含Digitonin和純化磁珠，客戶準(zhǔn)備好樣品、磁力架、PCR儀、渦旋儀以及所需實(shí)驗(yàn)的鼠抗和兔抗，搭配固定貨號接頭，即可完成實(shí)驗(yàn)。
Multi-CUT&Tag技術(shù)高分文章應(yīng)用
Multi-CUT&Tag技術(shù)在鼠腦中的研究應(yīng)用
2022年12月，Gonçalo Castelo-Branco課題組在Nature Biotechnology上發(fā)表的Multimodal chromatin profiling using nanobody-based single-cell CUT&Tag上推出了使用納米抗體-Tn5融合蛋白的nano-CUT&Tag（nano-CT），通過Anti-mouse Tn5和Anti-Rabbit Tn5，在鼠腦中實(shí)現(xiàn)特異性針對鼠抗和兔抗的Multi-CUT&Tag技術(shù)應(yīng)用，非常詳細(xì)地解剖大腦中的祖細(xì)胞如何特化成少突膠質(zhì)細(xì)胞，這些新的機(jī)制見解可以為我們在疾病背景下如何刺激少突膠質(zhì)細(xì)胞群的恢復(fù)提供線索。
圖：nano-CUT&Tag (nano-CT)在單細(xì)胞技術(shù)中的應(yīng)用
nano-CUT&Tag能減少實(shí)驗(yàn)流程，并且在單細(xì)胞水平背景更低，同時(shí)分群結(jié)果更明顯。
Multi-CUT&Tag技術(shù)在不同免疫細(xì)胞中的研究應(yīng)用
圖：NTT-seq在不同細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)bulk多靶標(biāo)的染色質(zhì)圖譜
[1] B. M, CB G. Multimodal chromatin profiling using nanobody-based single-cell CUT&Tag [published online ahead of print, 2022 Dec 19]. Nat Biotechnol. 2022;10.1038/s41587-022-01535-4. doi:10.1038/s41587-022-01535-4[IF:68.164]
[2] Stuart T, Hao S, Zhang B, et al. Nanobody-tethered transposition enables multifactorial chromatin profiling at single-cell resolution [published online ahead of print, 2022 Dec 19]. Nat Biotechnol.
