產(chǎn)品描述

Taq DNA Ligase是一種耐高溫連接酶，它能催化與同一互補靶DNA鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5´-磷酸和3´-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該催化反應只有當兩條寡核苷酸鏈與互補靶 DNA 完全配對，且兩條寡核苷酸鏈之間沒有間隙的條件下才會發(fā)生。因此，可以用它來檢測單堿基替換。Taq DNA連接酶以NAD+為輔酶因子，在45℃-65℃范圍內(nèi)均有活性。

 

產(chǎn)品組分

組分編號	組分名稱	產(chǎn)品編號/規(guī)格
		11051ES80 (1000 U)	11051ES84 (2000 U)	11051ES92 (10000 U)
11051-A	Taq DNA Ligase (40 U/µL)	25 μL	50 μL	5×50 μL
11051-B	10×Taq DNA Ligase Buffer（含NAD+）	250 μL	500 μL	5×500 μL

 

來源

重組E. coli 菌株，含有從Thermus aquaticus HB8中克隆的連接酶基因。

 

產(chǎn)品應用

1）用連接酶檢測反應和連接酶鏈式反應對等位基因進行特異性檢測；

2）通過PCR擴增摻入磷酸化寡核苷酸進行誘變；

3）同源重組。

 

單位定義

在50 μL反應體系中，45℃條件下，孵育15 min能使50%的1 μg經(jīng)BstEII消化的λDNA片段（12 bp粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。

 

質(zhì)量控制

切口酶殘留檢測：40 U本品和0.5 μg IL23R質(zhì)粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。

核酸外切酶殘留檢測：40 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，避免反復凍融。長時間（大于30天）保存時，B組分緩沖液應于-80℃保存。有效期一年。

 

注意事項

1）10×Taq DNA Ligase Buffer中含有輔酶因子NAD+，為了延長NAD+的半衰期，Buffer應于-80℃儲存；

2）Taq DNA Ligase不能替代T4 DNA ligase；

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

使用方法

1）反應體系配制：

組分	用量
DNA	up to 1 µg
10×Taq DNA Ligase Buffer	5 μL
Taq DNA Ligase(40 U/µL)	2 μL
ddH2O	up to 50 μL

2）反應條件：45℃溫育15 min。加入終止染液（50%甘油，50 mM EDTA和溴酚蘭）終止反應。

 

HB220304