Bright-One Step Luciferase Assay Kit Bright-One Step螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61 kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的過程中會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)為560 nm左右的生物螢光。
檢測(cè)原理如圖所示：
圖1：螢火蟲螢光素酶檢測(cè)原理圖
翌圣生物Bright-One Step 螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，高靈敏度，高信號(hào)強(qiáng)度。適合于對(duì)靈敏度有較高要求的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗或收集，而且可以直接使用，對(duì)細(xì)胞的裂解和檢測(cè)一步完成，省去了混合試劑的步驟，節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
產(chǎn)品信息
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貨號(hào) |
11412ES60/11412ES80/11412ES81 |
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規(guī)格 |
100T/10×100T /1000T |
組分信息
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組分名稱 |
11412ES60 |
11412ES80 |
11412ES81 |
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Bright-One Step 螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑 |
10 mL |
10×10 mL |
100 mL |
儲(chǔ)存條件
-80ºC避光保存，未開封試劑有效期一年；如果-20ºC避光保存，推薦2個(gè)星期以內(nèi)使用。拆封后推薦分裝（避光）。
使用說明
- 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
- 主要實(shí)驗(yàn)耗材與設(shè)備：200 μL 移液器或者排槍；不透光白色酶標(biāo)板或黑色酶標(biāo)板；多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測(cè)生物發(fā)光的儀器。
- 反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，請(qǐng)將細(xì)胞培養(yǎng)板，檢測(cè)試劑，酶標(biāo)儀（可在機(jī)器設(shè)定溫度）平衡至室溫（最好20-25℃）時(shí)再使用；檢測(cè)試劑復(fù)溫環(huán)境不能超過25℃。
注：培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，室溫放置20 min以平衡至室溫。檢測(cè)試劑解凍后要完全恢復(fù)到室溫再使用。
- 檢測(cè)儀器設(shè)置：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室所用儀器，設(shè)置對(duì)應(yīng)參數(shù)即可。
- 檢測(cè)板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板或者黑色酶標(biāo)板；如測(cè)量光度值較高，為避免互相干擾，也可隔孔上樣。
- 實(shí)驗(yàn)中請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。
- 實(shí)驗(yàn)步驟（以96孔板為例）
- 裂解細(xì)胞
- 貼壁細(xì)胞：推薦匯合度在90%以上。不用吸除細(xì)胞培養(yǎng)基，通常加入與培養(yǎng)基同體積的混合試劑即可。
- 懸浮細(xì)胞：只要細(xì)胞生長(zhǎng)良好，一般無(wú)密度要求。其他同貼壁細(xì)胞。
推薦使用量
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細(xì)胞培養(yǎng)皿 |
384孔板 |
96孔板 |
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培養(yǎng)基體積 |
25 μL |
100 μL |
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添加試劑體積 |
25 μL |
100 μL |
- 直接加入試劑后用槍頭吹打5次，使細(xì)胞裂解更充分。等待5 min，使細(xì)胞充分裂解。
- 用槍頭吹打時(shí)盡量不要有泡沫和氣泡出現(xiàn)。
- 上樣
每孔吸取100 μL混合液（檢測(cè)試劑+細(xì)胞培養(yǎng)基）到檢測(cè)板。
- 熒光檢測(cè)
設(shè)置酶標(biāo)儀參數(shù)。將檢測(cè)板放入酶標(biāo)儀，震動(dòng)幾秒，檢測(cè)即可。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 溫度影響：溫度直接影響熒光素酶的反應(yīng)速率。而發(fā)光強(qiáng)度和半衰期取決于熒光素酶的反應(yīng)速率。所以在加樣前，應(yīng)將需要將本試劑盒細(xì)胞培養(yǎng)板均平衡至室溫，以保證檢測(cè)結(jié)果的一致性。如將多孔板堆疊放置，將需要更長(zhǎng)時(shí)間恢復(fù)到室溫。如未充分平衡，可導(dǎo)致中心孔和四周孔之間的梯度效應(yīng)。
FAQ
1) 問：凍融對(duì)試劑盒的檢測(cè)效果是否有影響？
答：經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明-70℃反復(fù)凍融5次對(duì)發(fā)光值影響極其微小，且穩(wěn)定性基本無(wú)變化。但為了獲得相對(duì)較好的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，不推薦多次凍融。
Ver.CN20240530
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