產(chǎn)品簡介

 

螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61 kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的過程中會發(fā)出波長為560 nm左右的生物螢光。

檢測原理如圖所示：

                              圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖

翌圣生物Steady-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑盒的特點(diǎn)是操作簡便，半衰期可持續(xù)5 h以上。尤其在前2 h發(fā)光值變化較小。適合于超高通量或384孔板檢測。實(shí)驗(yàn)前無需對細(xì)胞進(jìn)行清洗或收集，可以直接使用，細(xì)胞裂解和檢測一步完成，省去了混合試劑的步驟，節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時間。

本產(chǎn)品測定樣品的線性范圍寬。96孔板中，可以在20萬個細(xì)胞范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

 

組分信息

 

組分名稱	11413ES60	11413ES80	11413ES81
Steady-One Step 螢光素酶報告基因檢測試劑	10 mL	10×10 mL	100 mL

 

儲存條件

 

-80ºC避光保存，未開封試劑有效期一年；如果-20ºC避光保存，推薦2個星期以內(nèi)使用。拆封后推薦分裝（避光）。

 

使用說明

 

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1. 主要實(shí)驗(yàn)耗材與設(shè)備：200 μL 移液器或者排槍；不透光白色酶標(biāo)板或黑色酶標(biāo)板；多功能酶標(biāo)儀或者其他能夠檢測生物發(fā)光的儀器。
2. 反應(yīng)溫度：酶促反應(yīng)對溫度較為敏感，請將細(xì)胞培養(yǎng)板，檢測試劑，酶標(biāo)儀（可在機(jī)器設(shè)定溫度）平衡至室溫（最好20-25℃）時再使用；檢測試劑復(fù)溫環(huán)境不能超過25℃。

注：培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板，室溫放置20 min以平衡至室溫。檢測試劑解凍后要完全恢復(fù)到室溫再使用。

3. 檢測儀器設(shè)置：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室所用儀器，設(shè)置對應(yīng)參數(shù)即可。
4. 檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光白色酶標(biāo)板或者黑色酶標(biāo)板；如測量光度值較高，為避免互相干擾，也可隔孔上樣。
5. 實(shí)驗(yàn)中請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套。

二、實(shí)驗(yàn)步驟（以96孔板為例）

      1.裂解細(xì)胞

       a.貼壁細(xì)胞：推薦匯合度在90%以上。不用吸除細(xì)胞培養(yǎng)基，通常加入與培養(yǎng)基同體積的混合試劑即可。

       b.懸浮細(xì)胞：只要細(xì)胞生長良好，一般無密度要求。其他同貼壁細(xì)胞。

推薦使用量

細(xì)胞培養(yǎng)皿	384孔板	96孔板
培養(yǎng)基體積	25 μL	100 μL
添加試劑體積	25 μL	100 μL

3. 直接加入試劑后用槍頭吹打5次，使細(xì)胞裂解更充分。等待5 min，使細(xì)胞充分裂解。
4. 用槍頭吹打時盡量不要有泡沫和氣泡出現(xiàn)。

2. 上樣

每孔吸取100 μL混合液（檢測試劑+細(xì)胞培養(yǎng)基）到檢測板。

3. 熒光檢測

設(shè)置酶標(biāo)儀參數(shù)（參考 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 3）。將檢測板放入酶標(biāo)儀，震動幾秒，檢測即可。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。

3. 溫度影響：溫度直接影響熒光素酶的反應(yīng)速率。而發(fā)光強(qiáng)度和半衰期取決于熒光素酶的反應(yīng)速率。所以在加樣前，應(yīng)將需要將本試劑盒細(xì)胞培養(yǎng)板均平衡至室溫，以保證檢測結(jié)果的一致性。如將多孔板堆疊放置，將需要更長時間恢復(fù)到室溫。如未充分平衡，可導(dǎo)致中心孔和四周孔之間的梯度效應(yīng)。

 

Ver.CN20240813