Anti-Myc MagAgarose Beads Anti-Myc純化磁珠
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產(chǎn)品說(shuō)明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Anti-Myc純化磁珠 ( Anti-Myc MagAgarose Beads)是一種聚合物磁性微球，由高質(zhì)量的鼠源抗Myc單克隆抗體與平均粒徑約為70 μm的瓊脂糖磁珠通過(guò)共價(jià)偶聯(lián)制備。瓊脂糖磁珠是采用天然高分子材料瓊脂糖與超順磁性材料復(fù)合形成的一種新型功能化磁性微球，具有更快的磁響應(yīng)性同時(shí)保持微球良好的分散性、極低的非特異性吸附和更豐富的結(jié)合位點(diǎn)等特性，可用于Myc標(biāo)簽蛋白的純化，也可用于帶有Myc標(biāo)簽的蛋白免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co-IP）。
產(chǎn)品性質(zhì)
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基質(zhì)（Matrix spherical） |
瓊脂糖磁珠 |
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配體（Ligand） |
鼠源抗Myc單克隆抗體 |
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結(jié)合能力（Binding Capacity） |
≥0.5 mg Myc標(biāo)簽融合蛋白/mL磁珠 |
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粒徑（Particle size） |
30-100 μm |
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磁珠濃度（Concentration） |
磁珠懸浮于儲(chǔ)存保護(hù)液中，含量為20%（V/V) |
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儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer） |
PBS, 0.01% Tween-20, 0.02% NaN3 |
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應(yīng)用（Application） |
蛋白純化、IP、Co-IP |
儲(chǔ)存條件
2~8℃保存，有效期2年。
使用說(shuō)明
- 緩沖液配制
【注】建議以下緩沖液在使用前用 0.22 μm 或 0.45 μm 濾膜過(guò)濾。
裂解緩沖液：0.15 M NaCl, 50 mM Tris, 1% NP-40, pH7.4或WB/IP裂解液（Cat#20118ES）
平衡/結(jié)合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl, 50 mM Tris, pH7.4或1x TBS Buffer，TBS 緩沖液(粉末)，PH 7.4,1L（Cat#60157ES）
洗脫緩沖液（競(jìng)爭(zhēng)洗脫）：平衡緩沖液溶解Myc多肽，終濃度為0.2-1 mg/mL
洗脫緩沖液（酸性洗脫）：0.1 M甘氨酸，pH 3.0
中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
- 樣品準(zhǔn)備
本操作說(shuō)明書提供以下三種樣品處理方法，建議您根據(jù)不同來(lái)源的樣品選擇適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行預(yù)處理，使待檢測(cè)蛋白釋放至樣品溶液中。
血清樣品處理：若目標(biāo)蛋白豐度較高， 建議用結(jié)合緩沖液稀釋血清樣品至目標(biāo)蛋白終濃度為50-150 µg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長(zhǎng)期保存)。
懸浮細(xì)胞樣品處理：離心收集細(xì)胞（4℃, 1000 g, 5 min），用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM）。
混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長(zhǎng)期保存）。
貼壁細(xì)胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞兩遍；用細(xì)胞刮棒刮脫細(xì)胞，收集至1.5 mL EP管內(nèi)，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應(yīng)在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM）。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸?；靹蚝笾糜诒咸幚?/font>10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長(zhǎng)期保存）。
- 應(yīng)用
1）蛋白純化，步驟如下：
a. 磁珠預(yù)處理
a）用移液器輕柔吹打Anti-Myc純化磁珠，使其充分混懸，依照所需純化的樣品量，取適量Anti-Myc純化磁珠懸液加入于離心管中，置于磁分離器上，磁性分離大約1 min，棄上清。
b）加入與懸浮液體積相同平衡緩沖液，并輕輕移液器混合，用移液器輕柔吹打重懸Anti-Myyc純化磁珠，放置在磁分離器上，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清。重復(fù)洗2次。
b. 樣品結(jié)合
a）在預(yù)處理后的磁珠中加入含有Myc標(biāo)簽的蛋白樣品，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育(常溫1~2 h，或4℃ 2~4 h，具體孵育時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整)；
b）將上述混合液置于磁力架上靜置，大約1 min，待溶液變澄清后，把上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中備用(上清可保留作為流穿液，用于電泳鑒定)，原離心管中剩余的即為蛋白-磁珠復(fù)合物；
c. 洗滌
a）向上述步驟所得的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入5倍磁珠體積的洗雜緩沖液，輕柔混勻磁珠5~10 min，接著在磁力架上靜置，大約1 min，待溶液變澄清后后, 吸棄上清；重復(fù)3-5次（最后1次洗滌更換新離心管）
d. 蛋白洗脫
根據(jù)下游用途選擇洗脫方法。
a）競(jìng)爭(zhēng)洗脫（Myc多肽洗脫）
加入3~5倍磁珠體積的競(jìng)爭(zhēng)洗脫緩沖液（終濃度為0.2-1 mg/mLMyc多肽洗脫液），輕柔混勻磁珠，4℃孵育30 min（慢慢搖晃）, 分離磁珠上的磁珠并保存含有目標(biāo)抗原的上清液，重復(fù)洗脫步驟一次以獲得更高的回收率。
b）酸性洗脫（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
加入3~5倍磁珠體積的酸性洗脫緩沖液（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0），輕柔混勻磁珠，室溫孵育5-10 min（慢慢搖晃），分離磁珠上的磁珠并保存含有目標(biāo)抗原的上清液，上清液應(yīng)立即用中和緩沖液（1 M Tris-HCl，pH 8.5）中和低pH。一般每100 μL洗脫液加入20 μL中和緩沖液。
注：酸性洗脫后磁珠要立即用平衡緩沖液平衡，Anti-Myc純化磁珠在酸性洗脫液中不要超過(guò)20 min。
2）免疫沉淀（IP），步驟如下：
a. 磁珠預(yù)處理
a）用移液器輕柔吹打Anti-Myc純化磁珠，使其充分混懸，取25~50 µL 磁珠懸液置于1.5 mL離心管中。
b）加入500 µL 平衡緩沖液，并輕輕移液器混合，用移液器輕柔吹打重懸Anti-Myc純化磁珠，放置在磁分離器上，待溶液變澄清后，用移液器吸棄上清。重復(fù)洗2次。
b. 樣品結(jié)合
a）在預(yù)處理后的磁珠中加入含有Myc標(biāo)簽的蛋白樣品，置于翻轉(zhuǎn)混合儀上孵育(常溫1~2 h，或4℃ 2~4 h，具體孵育時(shí)間可根據(jù)結(jié)合效果調(diào)整)；
b）將上述混合液置于磁力架上靜置，大約1 min，待溶液變澄清后，把上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中備用(上清可保留作為流穿液，用于電泳鑒定)，原離心管中剩余的即為蛋白-磁珠復(fù)合物；
c. 洗滌
a）向上述步驟所得的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入1000 µL的洗雜緩沖液，輕柔混勻磁珠5~10 min，接著在磁力架上靜置，大約1 min，待溶液變澄清后后, 吸棄上清；重復(fù)2-3次
d. 蛋白洗脫
根據(jù)下游用途選擇洗脫方法。
a）競(jìng)爭(zhēng)洗脫（Myc多肽洗脫）
加入100 μL競(jìng)爭(zhēng)洗脫緩沖液（終濃度為0.2-1 mg/mLMyc多肽洗脫液），輕柔混勻磁珠，4℃孵育30 min（慢慢搖晃）, 分離磁珠上的磁珠并保存含有目標(biāo)抗原的上清液，重復(fù)洗脫步驟一次以獲得更高的回收率。
b）酸性洗脫（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0）
加入100 μL酸性洗脫緩沖液（0.1 M Gly-HCl，pH 3.0），輕柔混勻磁珠，室溫孵育5-10 min（慢慢搖晃），分離磁珠上的磁珠并保存含有目標(biāo)抗原的上清液，上清液應(yīng)立即用中和緩沖液（1 M Tris-HCl，pH 8.5）中和低pH。一般每100 μL洗脫液加入20 μL中和緩沖液。
注：酸性洗脫后磁珠要立即用平衡緩沖液平衡，Anti-Myc純化磁珠在酸性洗脫液中不要超過(guò)20 min。
c）用SDS-PAGE上樣緩沖液洗脫
如需直接檢測(cè)目的蛋白，則在上述洗滌過(guò)的蛋白-磁珠復(fù)合物中加入80~100 μL 1×SDS-PAGE上樣緩沖液，煮沸 10 min，冷卻至室溫并在磁力架上分離磁珠，取上清進(jìn)行 SDS-PAGE 檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1. 請(qǐng)勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會(huì)導(dǎo)致磁珠聚集而降低結(jié)合能力。
2. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
Ver.CN20241118
