產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
G418 Sulfate（G418硫酸鹽），也稱作Geneticin（遺傳霉素），是一種結(jié)構(gòu)類似于慶大霉素B1（Gentamycin B1）的氨基糖苷類抗生素，通過影響80S核糖體功能和阻斷延伸步驟來干擾蛋白合成，對原核和真核等細(xì)胞都有毒性，包括細(xì)菌、酵母、高等植物和哺乳動物細(xì)胞 ，也包括原生動物和蠕蟲。其抗性基因（主要為neo基因）位于轉(zhuǎn)座子Tn601（903）或Tn5（來源于細(xì)菌），但是可以在真核細(xì)胞中表達(dá)。通過基因重組技術(shù)將這些抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選和維持培養(yǎng)攜帶抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。
哺乳動物細(xì)胞中，當(dāng)抗性基因neo被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組后 ，使其編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（amino-glycoside 3’-phosphotransferase，APH(3')II）。此酶通過共價修飾G418的氨基或羥基功能，抑制抗生素-核糖體間的相互作用，從而使得抗生素失活。這一特性賦予細(xì)胞產(chǎn)生抗性。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選實驗，需要建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）確定殺死無抗性細(xì)胞的最低有效濃度。
植物細(xì)胞中，通過轉(zhuǎn)染攜帶nptII基因的抗性質(zhì)粒孵育其抗性。nptII基因也能編碼表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，這個酶使得多種抗生素喪失活性，包括G418、卡那霉素和巴龍霉素。
產(chǎn)品性質(zhì)
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英文同義名（English synonym） |
Antibiotic G418; G418 Sulfate |
| 中文同義名（Chinese synonym） | G418硫酸鹽；遺傳霉素 |
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CAS號（CAS No.） |
108321-42-2 |
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分子式（Molecular formula） |
C20H40N4O10·2 H2SO4 |
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分子量（Molecular weight） |
692.7 g/mol |
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外觀（Appearance） |
白色粉末 |
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純度（Purity） |
~98% |
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活力（Potency）（anhydrous） |
>700 U/mg |
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溶解性（Solubility） |
溶于水 |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸與保存方法
常溫運輸。粉末-20 ℃避光保存，有效期3年。儲存液-20 ℃避光保存，有效期1年。避免受潮，否則會降低抗生素活力。
使用方法
1. G418儲存液的配制（50 mg/mL，活性濃度）
1）活力單位的換算
根據(jù)此公式進(jìn)行換算：（1000/A0）×A1=A2，其中A0是G418的活力值（Potency），因批次而異?？梢娕螌?yīng)的質(zhì)檢報告，或者瓶子上的標(biāo)簽。A1是想配制的活性G418濃度。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
比如若所用批次的G418 活力值為：750 U/mg，要配制50 mg/mL的G418活性濃度，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50 mg/mL=66.67 mg/mL。
如果配制10 mL的G418儲存液（活性濃度，50 mg/mL），則需要稱取666.7 mg粉末。
2）除菌和保存
根據(jù)上述換算得到的實際粉末稱重量，加入10 mL無菌去離子水內(nèi)使其完全溶解。
先用5 mL無菌去離子水預(yù)濕潤0.22 μm針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾，除菌后分裝成單次使用的小量（如1mL）放到-20 ℃凍存，1年穩(wěn)定。
【注】 ①不要對混濁的溶液進(jìn)行過濾，因為混濁的溶液意味著未完全溶解，過濾過程中會造成藥物損失，降低終液的活性。
②不建議使用液體培養(yǎng)基，NaCl、磷酸鹽溶液或者有機(jī)溶劑來制備儲存液。
2. 常用篩選濃度
一般來說，剛開始篩選轉(zhuǎn)化子需要高濃度的G418，并用一個較低濃度的G418用于維持培養(yǎng)。生長條件，細(xì)胞類型和其他的環(huán)境因素都可能影響G418的用量，因此第一次使用的實驗體系建議通過殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
通常情況，哺乳動物細(xì)胞篩選范圍200-2000 μg/mL；植物細(xì)胞：10-100 μg/mL；酵母細(xì)胞：500-1000 μg/mL。
以下是一些細(xì)胞類型使用G418篩選使用的濃度，可做參考。
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細(xì)胞類型 |
激活濃度 |
應(yīng)用 |
引用文獻(xiàn) |
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網(wǎng)柄菌屬 |
a) 10 μg/mL b) 30 μg/mL |
a）培養(yǎng)在培養(yǎng)液中 b）培養(yǎng)在凍干細(xì)菌上 |
Hirth,et. al., Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 7356-7360 (1982). |
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哺乳動物 |
a) 400 -1000 μg/mL b) 200 μg/mL |
a）用于篩選 b）用于維持生長 |
Canaani and Berg, Proc. Natl. Acad. Sci., v. 79, 5166-5170 (1982). |
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植物 |
a) 25-50 μg/mL b) 10 μg/mL |
a）用于篩選 b）用于維持生長 |
Ursic, et. al., Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 101:3, 1031-1037 (1981). |
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酵母 |
a) 500 μg/mL b) 125-200 μg/mL |
a）用于篩選 b）用于維持生長 |
Jimenez and Davies, Nature, v. 287, 869-871 (1980). |
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細(xì)菌 |
16 μg/mL |
用于篩選 |
Waitz, et. al., Antimicrob. Agents Chemother., v. 6:5, 579-581 (1974). |
3. 殺滅曲線的建立
【注意事項】
為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素最低濃度，可通過建立殺滅曲線來實現(xiàn)，至少選擇6個濃度。處理分裂期的細(xì)胞時G418的活性最強，因此在添加G418之前需要讓細(xì)胞培養(yǎng)一段時間。
1) 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37 ℃，CO2培養(yǎng)過夜。
【注】對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定0，50，100，200，400，800，1000 μg/mL。
3) 第二天：去除舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
4. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48 h后，用含有適當(dāng)濃度的G418篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷效果最好。當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
注意事項
1) 本品不可高壓滅菌；
2) G418不要和其他的抗生素/抗真菌劑（如青霉素/鏈霉素）共同使用，因為它們是G418的競爭性抑制劑。其他的抗生素也會產(chǎn)生交叉活性。
3) 配制G418溶液時，一定要根據(jù)G418批次不同的活力值（potency）來進(jìn)行換算，從而得到需要活性濃度的儲存液及工作液。
4) G418加入培養(yǎng)體系中未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞有可能不會被殺死，原因在于藥物濃度過低，或者細(xì)胞密度過高。另外，快速分裂的細(xì)胞相對于緩慢增殖細(xì)胞，更容易被殺死。對照細(xì)胞（未轉(zhuǎn)染）可能抗生素添加5-7天后才能殺死，轉(zhuǎn)染細(xì)胞（抗性克隆子）的克隆需要10-14天形成。
5) 即使加入殺死劑量的G418，細(xì)胞可能會繼續(xù)分裂2-3次。G418的藥效通常在2天后才變得明顯。
6) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7) 本產(chǎn)品僅作科研用途！
產(chǎn)品應(yīng)用場景和主要特點
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應(yīng)用場景 |
名稱 |
貨號 |
主要特點 |
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原生質(zhì)體制備 |
10404ES |
來源于蝸牛的混合酶，可降解植物細(xì)胞壁。 |
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生長調(diào)節(jié)劑 (生長促進(jìn)劑 生長延緩劑 新型植物激素） |
41001ES |
從幼嫩的玉米芯中發(fā)現(xiàn)分離出來的，促進(jìn)側(cè)芽生長，刺激細(xì)胞分化，促進(jìn)愈傷組織和種子發(fā)芽，還能防止葉片衰老。 |
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41002ES |
高純的反式玉米素，適用于植物組織培養(yǎng)。 |
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41003ES |
是一種活性高且應(yīng)用廣泛的天然合成細(xì)胞分裂素，功能上不僅促進(jìn)細(xì)胞分裂，刺激莖芽增殖，抑制根的生成，阻止葉片衰老，還能激活基因表達(dá)和代謝活性。 |
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40509ES |
適用于植物細(xì)胞或組織培養(yǎng)。 |
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41004ES |
抑制幼苗生長。 |
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41012ES |
近年來發(fā)現(xiàn)的一種植物激素或其前體，能夠抑制植物的分枝和側(cè)芽的生長。 |
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抗生素 (抗細(xì)菌 抗真菌 抗性篩選）
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60230ES |
特美汀對革蘭陽性菌、陰性菌、需氧及厭氧菌的抗菌范圍甚廣。 |
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60214ES |
實驗室中應(yīng)用非常普遍：微生物學(xué)研究，細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制細(xì)菌污染，分子生物學(xué)研究 |
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60208ES |
主要對革蘭氏陽性菌有效，作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，對人類的毒性較小。 |
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60162ES |
有效抑制多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長，從而有效控制細(xì)胞被細(xì)菌污染。 |
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60234ES |
有效的廣譜抗菌抗生素。 |
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60206ES |
對革蘭氏陽性菌和陰性菌及支原體都有抑制作用。 |
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60231ES |
一種環(huán)狀肽、抗真菌的抗生素，具有很強的抗真菌能力，主要抗酵母菌。 |
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60225ES |
用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。 |
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60220ES |
將抗性基因?qū)爰?xì)胞，使其獲得對G418的耐藥性，從而用來篩選攜帶抗性基因的細(xì)胞。 |
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除草劑 |
41011ES |
對多年生的惡習(xí)性雜草如茅草、香附子、狗牙根有很好的防除效果。 |
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60221ES |
毒性低，活性高，廣譜的非選擇性除草劑，其有效成分是草丁膦。 |
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60235ES |
用于篩選含有抗性基因的基因工程細(xì)胞系，且在玉米培養(yǎng)中比草銨膦的活性強。 |
相關(guān)產(chǎn)品推薦：
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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60201ES05/25/60 |
5/25/100g |
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60203ES10/60 |
10/100g |
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60204ES03/08/25 |
1/5/25g |
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60205ES08/25/60 |
5/25/100g |
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60206ES10/60 |
10/100g |
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60210ES25/76 |
25/500 mg |
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60212ES25/60 |
25/100g |
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60213ES60/80/90 |
100mg/1g/5g |
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60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
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60215ES08 |
5g |
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60216ES60/80 |
100/10×100mg |
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60217ES20/60 |
20/5×20mg |
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60218ES10/60 |
10/10×10mg |
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60219ES08 |
5g |
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60220ES03/08 |
1/5g |
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60225ES03/10 |
1/10g |
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60228ES08/25 |
5/25g |
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60230ES07/32 |
3.2/10×3.2g |
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60231ES03/08/10 |
1/5×1/10×1mg |
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60242ES03/10 |
1/10MU |
HB220914
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