產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。

本試劑盒采用獨(dú)特的分離技術(shù)，可以快速?gòu)募?xì)胞培養(yǎng)上清中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱(chēng)	41205ES10	41205ES20
41205-A	Exosome isolation solution (Cell Culture Media)	25 mL	50 mL
41205-B	Exosome Purification Column	10個(gè)	20個(gè)

 

儲(chǔ)存條件

 

室溫運(yùn)輸，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個(gè)月。

 

使用說(shuō)明

 

1.樣品制備：

收集細(xì)胞培養(yǎng)基至15 mL離心管中，3000×g，離心10 min；小心收集上清，并轉(zhuǎn)移至新的離心管中（勿破壞沉淀），于冰上放置待用。

【注】若收集的細(xì)胞上清不能及時(shí)使用，可先放置于-20℃或-80℃冷凍。使用時(shí)，于25℃水浴鍋中解凍，完全溶解后置于冰上待用

2.外泌體分離：

1）試劑準(zhǔn)備：使用前請(qǐng)將外泌體抽提試劑充分混勻。

2）上清預(yù)處理：吸取10 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清，加入2.5 mL外泌體抽提試劑（41205-A），渦旋振蕩混勻1 min，再放置于2℃至8℃靜置8 h以上（注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但不可超過(guò)24 h）；

細(xì)胞培養(yǎng)上清	外泌體抽提試劑	用途
10 mL	2.5 mL	電鏡、NTA粒徑、Western Blot
40 mL	10 mL	多基因核酸分析（qPCR）、測(cè)序

【注】上述用量的推薦，僅針對(duì)外泌體分泌量高的腫瘤細(xì)胞，對(duì)于外泌體分泌量少的樣品（例如干細(xì)胞）可以適當(dāng)加大上清的用量。其它規(guī)格的細(xì)胞上清可以根據(jù)外泌體抽提試劑的用量進(jìn)行等比例換算。

3. 外泌體沉淀：取出裝有混合液的離心管于4℃，10,000×g離心60 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清）。
4. 再次沉淀：將含有沉淀的離心管再次于4℃，10,000×g離心2 min，棄上清，收集沉淀（盡可能吸盡上清液）。
5. 外泌體重懸：取100 μL 1×PBS均勻吹打離心沉淀物，使其充分混勻，并轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中；

【注】外泌體顆粒會(huì)附著在管壁上，重懸時(shí)可以使用PBS對(duì)管壁進(jìn)行反復(fù)吹打洗脫（避免劇烈吹打）。重懸用的PBS的量可以根據(jù)細(xì)胞上清的量進(jìn)行等比例增加，也可以根據(jù)可能獲得的外泌體的量進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑黾踊蛘邷p少。

6. 外泌體的洗滌：將含有外泌體的1.5mL離心管于4℃，12,000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液。
7. 外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，-80℃ 長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。

外泌體純化：

1）純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗制品轉(zhuǎn)入Exosome Purification Column（EP柱）上管中，于4℃，3000g離心10 min，收集管底的液體，即為純化后的外泌體顆粒。

2）外泌體的保存：純化后的外泌體可于4℃保存3天，分裝后于-80℃ 長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進(jìn)行過(guò)濾除菌。初次嘗試時(shí)，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個(gè)較為合適的條件。

 

注意事項(xiàng)

 

1．為了確保獲得的外泌體是來(lái)自于您的細(xì)胞，最好使用無(wú)外泌體的血清進(jìn)行培養(yǎng)。

2．如果想要進(jìn)一步純化外泌體，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進(jìn)行親和純化。

3．產(chǎn)品只針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清來(lái)源的外泌體分離，不適用血清/血漿中外泌體的抽提，如果需要進(jìn)行血清/血漿的外泌體分離，請(qǐng)選用血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒。

4．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5．本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

Ver.CN20230920