產(chǎn)品簡介

 

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中；Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。

本試劑盒采用獨特的分離技術(shù)，可以快速從血清/血漿中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應(yīng)用。

 

組分信息

 

組分編號	組分名稱	41206ES30
41206-A	Exosome isolation solution（Serum/Plasma）	30 mL
41206-B	Exosome Purification Column	30個

 

儲存條件

 

室溫運輸，本試劑盒可于室溫穩(wěn)定保存24個月。

 

使用說明

 

1.樣品制備：

1）收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待完全融化后置于冰上待用。

2）取1 mL血清/血液樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃，3000×g離心10 min，棄沉淀，并將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中。

3）將轉(zhuǎn)移的上清，4℃，12,000×g離心10 min，棄沉淀，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中。

2.外泌體分離：

1）向預(yù)處理后的樣品中，加入3倍體積的1×PBS充分混勻。

Serum/Plasma+PBS	41206-A試劑用量
200 μL+600 μL	200 μL
1.0 mL+3.0 mL	1.0 mL

2）在PBS稀釋后的樣品中，繼續(xù)加入相應(yīng)量的41206-A試劑；蓋緊離心管蓋，渦旋振蕩1 min，放置于2℃至8℃靜置30 min以上（注：增加靜止時間可以提高外泌體得率，但不可超過24 h）。

3）取出裝有混合液的離心管，4℃，12,000×g離心15 min，棄上清（盡可能吸凈上清液），收集富含外泌體的沉淀。

4）將含有沉淀的離心管再次于4℃，12,000×g離心2 min，棄上清（盡可能吸凈上清液）。

5）吸取一定量體積的1×PBS溶液均勻吹打離心沉淀物，待其充分懸浮于PBS后，將懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中。

【注】加入PBS的量，建議根據(jù)初始樣本的體積決定，初始樣本體積：1×PBS體積=1.25:1。

6）將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃，12,000×g離心2 min，棄沉淀，保留上清液，該上清液即富含外泌體顆粒的溶液。

【注】此時如果依然可以看到明顯的沉淀，建議重復(fù)步驟6，重新進行洗滌和沉淀。

7）純化后的外泌體可于4℃保存3天，-80℃長期保存，建議對外泌體進行分裝后保存，避免反復(fù)凍融。

外泌體純化：

將收獲的外泌體顆粒粗制品轉(zhuǎn)入Exosome Purification Column （EP柱）上管中，于4℃，3000×g離心10 min，收集管底的液體，即為純化后的外泌體顆粒。

外泌體除菌（可選）：

獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進行過濾除菌。初次嘗試時，建議外泌體蛋白濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個較為合適的條件。

 

注意事項

 

1．使用前請將外泌體抽提試劑（41206-A）充分混勻。

2．產(chǎn)品只針對血清/血漿樣本，不適用其它體液或者是細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提；如果需要進行細(xì)胞上清外泌體分離，請選用細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒。

3．如果想要進一步純化外泌體，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進行親和純化。

4．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5．本產(chǎn)品僅作科研用途！

 

 

Ver.CN20230920