產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中。Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。

本試劑盒采用獨(dú)特的分離技術(shù)，可以快速?gòu)哪蛞褐蝎@得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測(cè)序等應(yīng)用。

 

組分信息

 

組分編號(hào)	組分名稱	41207ES02	41207ES20
41207-A	Exosome Concentration Solution*	12 mL	120 mL
41207-B	Exosome Solution Buffer*	1 mL	10 mL
41207-C	50 mL過濾柱	2 個(gè)	20 個(gè)

* Nuclease-free, Sterile

 

儲(chǔ)存條件

 

室溫運(yùn)輸，室溫保存，有效期2年。

 

使用說明

 

1.樣本預(yù)處理

1）取樣：收集新鮮的樣品，置于冰上待用；若為凍存的樣品，可于冰箱取出后放于25℃水浴中解凍，待完全融化后置于冰上待用；

2）樣品初始用量：?jiǎn)未翁崛r(shí)的尿液量建議不低于20 mL；

3）離心去細(xì)胞碎片：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3,000×g離心10 min，去除樣品中的細(xì)胞碎片(若沉淀較多，可3,000×g, 10 min離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液)；

4）離心去雜質(zhì)碎片：將離心上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，于4℃以10,000×g離心10 min, 去除樣品中的雜質(zhì)碎片；

5）樣本過濾：去除雜質(zhì)碎片的離心上清液轉(zhuǎn)移到50 mL離心過濾住中，于4℃以3,000×g離心10 min，取過濾柱下室液體(注：若上室中有殘留液體，可重復(fù)本步驟獲取更多樣本量)；

6）上清液轉(zhuǎn)移：去除雜質(zhì)碎片的上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。

2.外泌體提取

1）上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入41207-A試劑，具體的加入量如下(其他樣品量根據(jù)表中試劑用量進(jìn)行等比例變換):

 

樣品名稱	樣品量	41207-A 試劑用量
尿液	20 mL	4 mL

2）溶液混合：加入41207-A試劑后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻1min，再放置4℃靜置8h以上(注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但不可超過24h)；

3）沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于4℃以10,000×g離心60 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒(注：盡可能吸盡上清液)；

4）再次離心：將含有沉淀的離心管再次于4℃以10,000×g離心2 min，棄上清(注：盡可能吸盡上清液)；

5）外泌體重懸：取合適量的41207-B試劑均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中(建議每20 mL尿液用200 μL左右41207-B試劑重懸)；

6）收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃以12,000×g離心2 min，保留上清液，其中富含外泌體顆粒(若沉淀較多，可12,000×g, 2 min離心多次至無明顯沉淀，每次取離心上清液)；

7）外泌體的保存：純化后的外泌體以合適體積進(jìn)行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

 

注意事項(xiàng)

 

1. 使用前請(qǐng)將外泌體抽提試劑（41207-A）充分混勻;
2. 將外泌體樣本與裂解液按體積比1:1混勻后置于冰上裂解10 min；
3. 于4℃以12,000×g離心5 min取上清，用BCA法測(cè)定蛋白濃度及進(jìn)行Western Blot等后續(xù)實(shí)驗(yàn)；  
4. 進(jìn)行Western Blot實(shí)驗(yàn)時(shí)，取CD81陽(yáng)性對(duì)照品5 - 20 μL與實(shí)驗(yàn)樣品平行上樣；

注：初次使用CD81陽(yáng)性對(duì)照品時(shí)，可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件, 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的上樣量以獲得更佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

5. 二抗Goat anti-Rabbit IgG antibody (HRP)稀釋比例建議為1:2000~1:5000；
6. CD81陽(yáng)性對(duì)照品上樣前需70℃煮樣5 min，BCA及Western Blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑需自備。

 

 

Ver.CN20250314