1.什么是RIPA裂解液？

RIPA裂解液(Radio Immunoprecipitation Assay Lysis buffer,放射免疫沉淀法裂解緩沖液)是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜(包括核膜)，從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實(shí)驗(yàn)。

 

2.RIPA裂解液里有什么？

  RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白間的相互作用等方式裂解組織或細(xì)胞；蛋白酶抑制劑可有效抑制各類蛋白酶的活性，避免蛋白過度降解；磷酸酶抑制劑可有效抑制去磷酸化作用。各組分具體作用見表1。

   值得注意的是，由于RIPA裂解液中含有一些穩(wěn)定性相對較弱的酶類抑制劑，故應(yīng)放在-20℃保存。其中PMSF的穩(wěn)定性極弱，半衰期只有0.5 h，所以必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

表1.RIPA裂解液里的成分及其作用

分類	名稱	作用
有效裂解成分	Sodium Deoxycholate	陰離子去垢劑；能夠有效破壞多種蛋白間的相互作用
	1%Triton X-100	非離子型表面活性劑；溶解脂質(zhì)，增加細(xì)胞膜的通透性
	0.1% SDS	表面活性劑和還原劑；有增溶作用
	1% NP-40	溫和的非離子型去垢劑；可破壞掉細(xì)胞膜，獲得胞漿蛋白，對核膜的破壞作用較弱
蛋白酶抑制劑	PMSF	抑制絲氨酸蛋白酶：胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶 抑制半胱氨酸蛋白酶：木瓜蛋白酶
	Leupeptin	抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纖溶蛋白酶、纖溶酶和組織蛋白酶B
	Aprotinin	抑制絲氨酸蛋白酶：抑制纖維蛋白溶解、激肽釋放酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶 不抑制凝血酶或凝血因子X
	Pepstatin	抑制天冬氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、腎素、組織蛋白酶D、凝乳酶、多種微生物酸性蛋白酶
	EDTA-Na	抑制金屬蛋白酶
磷酸酶抑制劑	NaF	有效抑制去磷酸化作用
	Na3VO4	有效抑制去磷酸化作用
	Beta-glycerophosphate	有效抑制去磷酸化作用
	Na2PO4	有效抑制去磷酸化作用

 

3.RIPA裂解液有哪些種類？

目前市面上的裂解液根據(jù)其主要裂解成分等不同大致分為強(qiáng)、中、弱等幾類。表2列舉了翌圣生物提供的四種RIPA裂解液，可滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。

表2.翌圣生物的四種RIPA裂解液及其基本特點(diǎn)

貨號	20101	20114	20115	20118
名稱	RIPA裂解液（強(qiáng)）	RIPA裂解液（弱）	RIPA裂解液（中）	免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液
主要用途	WB IP	WB IP Co-IP	WB IP	WB IP Co-IP
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1% Sodium Deoxycholate， 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25% Sodium Deoxycholate	1% NP-40， 0.5% Sodium Deoxycholate， 0.1% SDS	1%Triton X-100
裂解強(qiáng)度	強(qiáng)	溫和	中	溫和
提取膜蛋白	很好	一般	較好	一般
提取胞漿蛋白	很好	很好	很好	很好
提取核蛋白	很好	較好	較好	較好
提取胞漿磷酸化蛋白	很好	很好	很好	很好
提取細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子	很好	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是	是
含磷酸酯酶抑制劑	是	是	是	是

 

4.如何選擇合適的RIPA裂解液？

     如果您只是要做普通的WB、IP或者co-IP，我們建議您使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)，該裂解液在裂解細(xì)胞或組織后一般不會形成粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊，不必采用超聲處理就可進(jìn)行下一步操作。同時(shí)，該裂解液還適用于磷酸化蛋白的WB檢測。

     如果使用免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液(20118)的效果不是很好，那您的蛋白可能比較特殊，我們建議您可以嘗試另外幾種裂解液。如果您的蛋白是難溶性的蛋白，建議您可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液，如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)；如果您在做IP實(shí)驗(yàn)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)背景很高，即有很多非特異性蛋白被IP下來，這時(shí)候您需使用裂解強(qiáng)度較強(qiáng)的裂解液，比如RIPA裂解液(強(qiáng)/中)。反之，如果您發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法IP下來，則說明您使用的裂解液強(qiáng)度過強(qiáng)，此時(shí)需使用裂解強(qiáng)度較弱的裂解液，比如RIPA裂解液(弱)。

 

5. RIPA裂解液適用于哪些細(xì)胞？

幾乎適用于所有實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的動物細(xì)胞和各種組織。包括各種懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞及動物組織等。

 

6. 如何判斷細(xì)胞的裂解程度？

細(xì)胞裂解：加入RIPA后，充分裂解的細(xì)胞，沒有細(xì)胞沉淀，很粘稠。如果像渾濁的水一樣粘性很小則可能是裂解液得量加太多導(dǎo)致的；相反，如果RIPA裂解液后出現(xiàn)膠狀物體，離心不能沉淀則可能是蛋白太多，RIPA裂解液加入的量太少導(dǎo)致的。

組織裂解：先將組織剪成細(xì)小的碎片，之后利用勻漿器或超聲破碎的方法，鏡檢顯示細(xì)胞破碎率大于90%，同時(shí)組織已經(jīng)完全裂解，沒有明顯的小組織塊。之后按照細(xì)胞裂解的步驟進(jìn)行裂解，裂解程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)與細(xì)胞裂解一致。

RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則需通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

 

7. RIPA儲存出現(xiàn)白色沉淀，為什么？

一般是由于裂解液中SDS在儲存的時(shí)候沉淀析出導(dǎo)致，這時(shí)只需將裂解液放置于37℃水浴加熱后恢復(fù)室溫即可使用。

 

8. RIPA裂解液可以獲得細(xì)胞中的不同蛋白嗎？ 

RIPA裂解液提取的是全蛋白，包括核蛋白、漿蛋白、膜蛋白等。如果要提取特定的蛋白（如：核蛋白、膜蛋白）則可利用專門提這類蛋白的試劑盒進(jìn)行提取。

紙上得來終覺淺，覺知此事要躬行。小翌在這里給出的建議僅供大家參考，具體裂解液的選擇和使用，還需要根據(jù)您自己的實(shí)驗(yàn)需求和實(shí)驗(yàn)效果選擇適合您實(shí)驗(yàn)的RIPA裂解液。

 

9.訂購信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格	儲存	價(jià)格（元）
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強(qiáng)）	20101ES60	100 mL	-20℃	228
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱）	20114ES60	100 mL	-20℃	228
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中）	20115ES60	100 mL	-20℃	228
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印跡及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液	20118ES60	100 mL	-20℃	228

 

10.相關(guān)產(chǎn)品推薦

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格	價(jià)格（元）
蛋白酶抑制劑Cocktail，EDTA-free，迷你型，片劑	20123	1瓶（10片）	553
蛋白酶抑制劑Cocktail，EDTA-free，100X DMSO儲液	20124	1 mL	217
磷酸酶抑制劑混合物（100X，儲存液）	20109	2 mL	207
細(xì)胞核/細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒	20126	50 T	935
細(xì)胞膜/細(xì)胞漿蛋白抽提試劑盒	20127	50 T	835

產(chǎn)品詳詢，請撥打400-6111-883

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