產(chǎn)品說明書
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COA
已發(fā)表文獻
背景描述
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結(jié)合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結(jié)合，通常用來標記組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結(jié)合。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng)；鬼筆環(huán)肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì)；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1 µg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為iFluorTM 488標記的鬼筆環(huán)肽，可發(fā)出高亮度、光穩(wěn)定的綠色熒光，染色反應(yīng)特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。iFluorTM 488 鬼筆環(huán)肽染色與用于細胞分析的其他熒光染色完全兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他iFluorTM偶聯(lián)物（包含iFluorTM偶聯(lián)二抗）。另外，經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性，適用性廣泛。
本品以1 mg/mL的濃度提供。
產(chǎn)品性質(zhì)
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分子量（Molecular Weight） |
～1900 |
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最大激發(fā)/發(fā)射波長（Ex/Em） |
493/517 nm |
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溶解性（Solubility） |
溶于DMSO |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸與保存方法
冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。
注意事項
1）鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人的半數(shù)致死劑量LD50約2 mg/kg）。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3）本產(chǎn)品僅作科研用途！
需要自備材料
1）1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養(yǎng)級別（貨號：60145ES76）
2）固定液4%多聚甲醛（不含甲醇）（溶于PBS緩沖液）（貨號：36314ES60）
3）透化液Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
4）BSA，標準級別（貨號：36101ES25）
5）DAPI染液（即用型）（貨號：40728ES50）
操作步驟
1. 1×工作液準備
吸取1 µL 1000×iFluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽（溶于DMSO）到1 mL 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。
注：1）使用前需將1000×DMSO iFluorTM 488鬼筆環(huán)肽儲存液分裝并于-20℃避光干燥保存。
2）不同的細胞染色情況不同，相應(yīng)iFluorTM 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。
2. 染色步驟
1）細胞培養(yǎng)過夜或更長，使其密度達到50-60%匯合度。
2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。
3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液進行細胞固定，室溫固定10-30 min。
注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
4）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10 min。
5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min，從而增加其通透性。
6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10 min。
7）取足夠量新鮮配好的 iFluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽工作液以覆蓋住細胞，如：100 µL/孔（96孔板），室溫避光染色20-90 min。
8）用PBS清洗細胞3次，每次5 min。
9）（可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復(fù)染，如：100 µL/孔（96孔板），室溫3~5 min。用PBS清洗細胞2次，每次5 min。
10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇iFluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=493/517 nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454 nm）。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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40733ES03 |
1 mg |
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40734ES75/80 |
300 T/1 mg |
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40735ES75/80 |
300 T/1 mg |
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40736ES75 |
300 T |
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40737ES75 |
300 T |
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40762ES75 |
300 T |
HB211213
