產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Hieff Trans® mRNA轉(zhuǎn)染試劑是一款針對mRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染的陽離子多聚物轉(zhuǎn)染試劑，對常規(guī)細(xì)胞、原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞都具有較高的轉(zhuǎn)染效率。其獨(dú)特的配方使其可直接加入培養(yǎng)基中，血清的存在不會影響轉(zhuǎn)染效率，這樣可以減少去除血清對細(xì)胞的損傷。轉(zhuǎn)染后不需要除去核酸-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基，也可根據(jù)細(xì)胞營養(yǎng)狀態(tài)在4-6小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品2-8ºC保存，一年有效。不可冷凍！
注意事項(xiàng)
1）轉(zhuǎn)染操作時(shí)，以細(xì)胞融合度達(dá)70%-80%為佳，具體鋪板密度根據(jù)細(xì)胞情況酌情而定。
2）制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無血清培養(yǎng)基稀釋mRNA和轉(zhuǎn)染試劑。
3）使用無RNA酶污染的耗材與試劑。
4）2-8ºC保存，要注意避免多次反復(fù)長時(shí)間開蓋。
5）初次使用應(yīng)優(yōu)化核酸濃度和試劑量以得到最高的轉(zhuǎn)染效率。
6）本產(chǎn)品僅作科研用途！
操作流程（以24孔板為例，其他培養(yǎng)板加樣體積請參考表一）
注：轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。
1. 細(xì)胞鋪板，至轉(zhuǎn)染操作時(shí)，以細(xì)胞融合度達(dá)70%-80%為佳。
2. 按照以下體系配制mRNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物：
1）對于每孔細(xì)胞，使用10 μL無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM培養(yǎng)基）稀釋0.4 μg mRNA，輕輕混勻。
2）對于每孔細(xì)胞，使用10 μL無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEM培養(yǎng)基）稀釋0.8-1.6 μL轉(zhuǎn)染試劑，輕輕混勻，室溫孵育5 min。
3）將稀釋的mRNA與稀釋的轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻。
4）室溫靜置孵育20 min。
3. 將mRNA-轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物逐滴加到細(xì)胞中，輕輕混勻。
4. 37℃，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-96 h，直至進(jìn)行基因表達(dá)分析。
不同細(xì)胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染用量（僅供參考）：
|
培養(yǎng)容器 |
表面積 |
每孔體積 |
mRNA轉(zhuǎn)染 |
||
|
培養(yǎng)基體積 |
稀釋液體積 |
mRNA |
試劑體積 |
||
|
96-well |
0.3 cm2 |
100 μL |
2×5 μL |
0.2 μg |
0.2-0.4 μL |
|
24-well |
2 cm2 |
500 μL |
2×10 μL |
0.4 μg |
0.8-1.6 μL |
|
12-well |
4 cm2 |
1 mL |
2×20 μL |
0.8 μg |
1.6-3.2 μL |
|
6-well |
10 cm2 |
2 mL |
2×50 μL |
1 μg |
2-4 μL |
|
60-mm |
20 cm2 |
5 mL |
2×100 μL |
4 μg |
8-16 μL |
|
10-cm |
60 cm2 |
15 mL |
2×300 μL |
12 μg |
24-48 μL |
【注】該表使用量僅供參考，mRNA與轉(zhuǎn)染試劑具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。建議使用時(shí)比值保持在1:0.5-1:5之間。
HB221102
