細(xì)胞示蹤熒光探針
一、線粒體探針
線粒體是一種存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中的由兩層膜包被的細(xì)胞器，直徑在0.5-10微米左右。線粒體有“細(xì)胞動(dòng)力工廠”之稱，是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要場(chǎng)所，主要為細(xì)胞活動(dòng)提供能量。另外，線粒體還承擔(dān)了許多其他生理功能，如調(diào)節(jié)膜電位并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。線粒體膜通透性增加也能使誘導(dǎo)凋亡因子(AIF)等分子釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
1.MitoTracker® 線粒體示蹤
MitoTracker系列探針專用于檢測(cè)活細(xì)胞線粒體，具有細(xì)胞通透性，易于在有活性的線粒體中積累。一旦線粒體被標(biāo)記，細(xì)胞就能用甲醛固定劑固定，一些MitoTracker探針能在固定之后保留在線粒體內(nèi)。盡管傳統(tǒng)的線粒體探針如Rhodamine 123也很容易標(biāo)記線粒體，但是一旦線粒體的膜電位損失，它們就很容易被洗掉。
MitoTracker系列探針具有多種顏色，適合于多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。MitoTracker Green FM 是線粒體綠色熒光染料，這種染料定位于線粒體的能力看起來(lái)不受線粒體膜電位影響。 該染料可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色，但是乙醛固定后不能穩(wěn)定保存。 MitoTracker Red CMXRos 是一種紅色熒光染料，用于對(duì)活細(xì)胞線粒體進(jìn)行染色，并且該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。MitoTracker Red CM-H2XRos 是 MitoTracker Red 的非熒光還原態(tài)，在氧化時(shí)才會(huì)發(fā)出紅色熒光。該染料也可以對(duì)活細(xì)胞線粒體進(jìn)行染色并且其積累取決于膜電位。 乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。但是，該染料在體外發(fā)生氧化反應(yīng)，就不能檢測(cè)到熒光，所以要求保存在惰性（如氮?dú)猓怏w中。MitoTracker® Deep Red FM 是一種遠(yuǎn)紅熒光染料（Ex/Em約為 640/662 nm），用于對(duì)活細(xì)胞線粒體進(jìn)行染色，并且該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后，該染料可穩(wěn)定保存。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em(nm) |
是否可以固定 |
規(guī)格 |
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40740ES50 |
579/599 |
Yes |
50µg |
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40741ES50 |
579/599 |
Yes |
50µg |
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40742ES50 |
490/516 |
No |
50µg |
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40743ES50 |
644/665 |
Yes |
50µg |
2.早期凋亡檢測(cè)（線粒體膜電位檢測(cè)探針）
在細(xì)胞凋亡的過程中往往伴隨著線粒體跨膜電位的破壞，這被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中最早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽(yáng)離子熒光染料如 Rhodamine 123、JC-1、JC-10等可結(jié)合到線粒體基質(zhì)，其熒光的增強(qiáng)或減弱說(shuō)明線粒體內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低。
JC-1是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針，表現(xiàn)出電勢(shì)依賴性的積聚在線粒體內(nèi)。正常線粒體內(nèi)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；而凋亡細(xì)胞，線粒體跨膜電位去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，濃度降低，逆轉(zhuǎn)為發(fā)射綠色熒光的單體形式。因此顏色的變化非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。線粒體的去極化程度也可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來(lái)衡量。JC-1的流式檢測(cè)是比較常見的一種方法。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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40705ES03 |
1mg |
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40705ES08 |
5mg |
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40706ES60 |
100T |
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40707ES03 |
1mg |
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40707ES08 |
5mg |
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40752ES60 |
100T |
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40333ES76 |
100ul |
3.線粒體與活性氧檢測(cè)
活性氧，Reactive Oxygen Species（ROS）包括3種含氧的自由基：羥自由基(·OH)，超氧陰離子(O2·)，氫過氧自由基（HO2）；2種過氧化物：過氧化氫(H2O2)和過氧化脂質(zhì)（ROOH）；以及一種含氮的氧化物（NO）。
活性氧（ROS）在通路中的作用：
1）建立宿主自身防御系統(tǒng)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，有利于干細(xì)胞增殖、神經(jīng)保護(hù)等；
2）濃度過高會(huì)引起細(xì)胞凋亡，細(xì)胞損傷，脂質(zhì)和蛋白過氧化等。
活性氧（ROS）的主要來(lái)源：
1）線粒體的氧化呼吸鏈；2）NADP氧化酶；3）細(xì)胞色素P-450。
驗(yàn)證ROS是否來(lái)自線粒體的方法?
當(dāng)線粒體產(chǎn)生過量ROS的時(shí)候，必然導(dǎo)致線粒體本身的正常結(jié)構(gòu)和物理狀態(tài)發(fā)生變化，常見的比如線粒體膜完整性和膜電位的缺失。
（一）Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧（ROS）檢測(cè)試劑盒
活性氧檢測(cè)試劑盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一種基于熒光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate）的熒光強(qiáng)度變化，定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的常用方法。
DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不會(huì)通透細(xì)胞膜，因此探針很容易被積聚在細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧能夠氧化無(wú)熒光的DCFH生成有熒光的DCF。綠色熒光強(qiáng)度與活性氧的水平成正比。在最大激發(fā)波長(zhǎng)480nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)525nm處，使用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀或激光共聚焦顯微鏡等檢測(cè)熒光信號(hào)，并根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照Rosup的熒光信號(hào)來(lái)分析活性氧的真正水平。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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50101ES01 |
1 Kit (1000 tests) |
（二）CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection氧化應(yīng)激檢測(cè)橙色探針（活細(xì)胞）
CellROX Orange氧化應(yīng)激試劑是能夠可靠地檢測(cè)活細(xì)胞中的ROS的熒光探針。細(xì)胞滲透性CellROX試劑一旦氧化，即可發(fā)出明亮熒光。CellROX Orange試劑熒光信號(hào)主要位于胞質(zhì)。
采用傳統(tǒng)的熒光顯微鏡、高內(nèi)涵成像和分析、微孔板熒光光度計(jì)或流式細(xì)胞儀測(cè)量產(chǎn)生的熒光。染色操作過程極為簡(jiǎn)單，可將試劑直接加入完全培養(yǎng)基或緩沖液中的細(xì)胞。與傳統(tǒng)的ROS檢測(cè)染料相比，CellROX試劑的光穩(wěn)定性極強(qiáng)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
A適用于熒光成像、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞術(shù)和高內(nèi)涵篩選；
B對(duì)光漂白作用具有較強(qiáng)的抵抗力；
C多重分析：可與不同熒光素染料相兼容；
D功能多樣：適用于活細(xì)胞成像或固定樣本。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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50103ES50 |
CellROX Orange Reagent, for Live Cell Oxidative Stress Detection |
1×50 μL |
（三）MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator 線粒體超氧化物紅色熒光探針
MitoSOX Red是活細(xì)胞中的一種特異性靶向線粒體的新型熒光染料。 MitoSOX Red被超氧化物而非其他活性氧類(ROS)和活性氮類(RNS)氧化，氧化產(chǎn)物結(jié)合核酸后產(chǎn)生大量紅色熒光，線粒體產(chǎn)生的超氧化物可在熒光顯微鏡下顯示。MitoSOX Red可用于在對(duì)活細(xì)胞線粒體釋放的超氧化物的直接檢測(cè)中區(qū)別分離線粒體中的人為誤差。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
A容易為超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系統(tǒng)氧化；
B吸收波長(zhǎng)⁄發(fā)射波長(zhǎng)最大值: ~510⁄580 nm；
C用于活細(xì)胞成像；
D快速選擇性靶向線粒體；
E快速簡(jiǎn)便檢測(cè)活細(xì)胞線粒體中的超氧化物。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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50301ES76 |
500 mg |
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50302ES76 |
500 mg |
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50303ES05 |
2 g |
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50304ES05 |
2 g |
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50304ES10 |
10 g |
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50305ES70 |
200 mg |
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40778ES50 |
50 µg |
4.線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（mitochondrial permeablity transition pore，mPTP）分析
線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（mitochondrial permeablity transition pore，mPTP），又稱線粒體巨型通道（magachannel），是存在于線粒體內(nèi)外膜之間的非選擇性高導(dǎo)電性通道，由多種蛋白質(zhì)復(fù)合組成。線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔 (mPTP)可能參與了細(xì)胞死亡過程中線粒體成分的釋放。 相對(duì)于僅基于線粒體膜電位的分析來(lái)說(shuō)，該分析試劑盒能更直接地檢測(cè)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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40756ES60 |
Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit ( flow cytometry) |
100T |
5.線粒體定位載體
線粒體定位載體用于研究重組蛋白在線粒體（mitochondria）的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據(jù)自己的研究目的選擇相應(yīng)的定位表達(dá)載體，再將感興趣的ORF片段構(gòu)建到表達(dá)載體中進(jìn)行研究。
陽(yáng)性對(duì)照可以表達(dá)GFP，且同樣定位在線粒體上。
細(xì)胞定位載體具有以下特點(diǎn)：
1）CMV強(qiáng)啟動(dòng)子啟動(dòng)蛋白的表達(dá)；
2）C端攜帶c-myc標(biāo)簽，可用anti-myc抗體檢測(cè)；
3）BGH多腺苷酸化位點(diǎn)可以穩(wěn)定mRNA；
4）f1原點(diǎn)單鏈正義鏈DNA f1 origin for single-stranded rescue of sense DNA
5）攜帶Neomycin抗性基因可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選；
6）Ampicillin抗性和pUC原點(diǎn)可用于E. coli中的篩選；
7）載體帶的熒光標(biāo)記可通過熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察；
8）應(yīng)用于研究蛋白在微環(huán)境中的檢測(cè)。
細(xì)胞定位是指某種蛋白或表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞中的具體存在位置，例如在細(xì)胞核（ nucleus）內(nèi)、細(xì)胞質(zhì)（ cytoplasm）內(nèi)、線粒體（mitochondria）或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum）上
二、LysoTracker和Lysosensor溶酶體探針
溶酶體為單層膜蛋白包圍的內(nèi)含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶，如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等，是物質(zhì)代謝的場(chǎng)所。Lysotracker系列探針用于標(biāo)記和追蹤活細(xì)胞中的酸性細(xì)胞器，該系列探針對(duì)酸性細(xì)胞器具有很高的選擇性，且標(biāo)記效率高（納摩爾濃度即可有效標(biāo)記）。Lysotracker探針是細(xì)胞膜通透性的，一般聚集在球形的細(xì)胞器中。
LysoSensor系列探針可用于活細(xì)胞中溶酶體生物發(fā)生動(dòng)力學(xué)研究，該探針是向酸性的探針，由于質(zhì)子化作用聚集在酸性細(xì)胞器中。質(zhì)子化也緩解了染料的熒光淬滅，使熒光強(qiáng)度增加。因此，LysoSensor探針在酸化的環(huán)境中表現(xiàn)出pH依賴的熒光強(qiáng)度增加，而LysoTracker的熒光則沒有明顯變化。LysoSensor™ Green DND-189的pKa值很低，處于酸性環(huán)境中才會(huì)發(fā)出熒光。LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160很特別，具有雙激發(fā)和雙發(fā)射峰，是pH依賴的。在酸性細(xì)胞器中，它主要發(fā)黃色熒光，而在弱酸性細(xì)胞器中，熒光則為藍(lán)色。
注：探針標(biāo)記細(xì)胞后，只能用熒光顯微鏡觀察，而不能用流式或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)，因?yàn)樵诳偧?xì)胞熒光中溶酶體熒光只占非常小的比例。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Abs (nm) |
Em (nm) |
pKa |
規(guī)格 |
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40738ES50 |
504 |
511 |
NA |
50μl |
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40739ES50 |
577 |
590 |
NA |
50μl |
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40767ES50 |
443 |
505 |
5.2 |
50μl |
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40768ES50 |
329, 384 |
440, 540 |
4.2 |
50μl |
三、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)探針
1.活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)探針
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞中由膜圍成的分支小管、小囊或扁平囊狀結(jié)構(gòu)連通而成的管道系統(tǒng)，可分為粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)兩種。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上附著有核糖體，是合成蛋白質(zhì)的主要場(chǎng)所；滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)則功能多樣，比如在肝細(xì)胞中與解毒和糖代謝有關(guān)。ER-Tracker系列探針是細(xì)胞通透性的活細(xì)胞染料，是ER高度選擇性的。ER-Tracker Blue-White DPX 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)藍(lán)色熒光探針，染色后可用醛類固定，但熒光信號(hào)會(huì)又明顯損失【信號(hào)部分保留】。ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針，染色后可用醛類固定，但熒光信號(hào)會(huì)又明顯損失【信號(hào)部分保留】。ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針染色后可用醛類固定，但熒光信號(hào)會(huì)又明顯損失【信號(hào)部分保留】。
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Yeasen貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em (nm) |
Filter |
規(guī)格 |
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40761ES50 |
ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging內(nèi)質(zhì)網(wǎng)藍(lán)色熒光探針（活細(xì)胞） |
374/430-640 |
DAPI or UV longpass |
50µl |
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40763ES20 |
ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide), for live-cell imaging |
504/511 |
FITC |
20µl (1mM) |
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40764ES20 |
ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imaging |
587/615 |
TRITC |
20µl (1mM) |
2.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位載體
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位載體用于研究重組蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic reticulum）的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據(jù)自己的研究目的選擇相應(yīng)的定位表達(dá)載體，再將感興趣的ORF片段構(gòu)建到表達(dá)載體中進(jìn)行研究。
陽(yáng)性對(duì)照可以表達(dá)GFP，且同樣定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。
四、高爾基體探針
高爾基復(fù)合體的功能主要是將由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)來(lái)的蛋白類物質(zhì)進(jìn)行加工、濃縮、儲(chǔ)存和運(yùn)送，最后形成分泌泡排除。
1.活細(xì)胞高爾基體探針
Golgi-Tracker Green（BODIPY® FL C5-Ceramide）適用于活細(xì)胞高爾基體染色探針，不適用于固定細(xì)胞染色。
Golgi-Tracker red（BODIPY® TR C5-Ceramide） 適用于活細(xì)胞高爾基體染色探針，不適用于固定細(xì)胞染色。
五、細(xì)胞質(zhì)膜探針——親脂性膜探針
DiD，DiO，DiI和DiR染料是一類親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。進(jìn)入細(xì)胞膜后，染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。染料在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。它們的熒光顏色區(qū)分明顯：DiI(橙色熒光)，DiO(綠色熒光)，DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)這使得他們可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析，另外，DiI (DiIC18(3)) 也可用于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜標(biāo)記。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，自熒光背景低，特別適用于標(biāo)記細(xì)胞和脂質(zhì)體的體內(nèi)追蹤。
DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料，常用于神經(jīng)元的示蹤。DiA可與DiI雙色標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞，是一種比DiO更好的示蹤探針。
CellTracker CM-DiI為DiI 的衍生物，在DiI 中加入了具有中度巰基反應(yīng)特性的氯甲基取代物，后者能與細(xì)胞內(nèi)含巰基的肽和蛋白結(jié)合，使得CM-DiI 能夠抵抗醛類的固定作用。CM-DiI 在細(xì)胞固定、破膜及石蠟包埋的整個(gè)過程中均能很好的保留在細(xì)胞內(nèi)，因此較DiI 更適于固定后標(biāo)本的長(zhǎng)期示蹤?？膳cGFP一起用于雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)。
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em (nm) |
規(guī)格 |
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40725ES10 |
484/501 |
10mg |
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40725ES25 |
484/501 |
25mg |
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40726ES10 |
550/567 |
10mg |
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40772ES25 |
550/567 |
25mg |
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40757ES25 |
748/780 |
25mg |
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40758ES25 |
644/663 |
25mg |
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40718ES50 |
553/570 |
1×50μg |
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40718ES60 |
553/570 |
2×50μg |
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40718ES72 |
553/570 |
5×50μg |
六、細(xì)胞質(zhì)探針
細(xì)胞質(zhì)由細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、內(nèi)膜系統(tǒng)、細(xì)胞骨架和包涵物組成，在生活狀態(tài)下為透明膠狀物，是生命活動(dòng)主要場(chǎng)所。
1.活細(xì)胞探針
Fluorescein diacetate即FDA，中文名為二乙酸熒光素，是一種具細(xì)胞膜滲透性的酯酶底物，常用作細(xì)胞活力分析。不僅可以測(cè)定酯酶活力，因FDA需要在酯酶的催化下才能活化產(chǎn)生綠色熒光；而且還可用來(lái)鑒定細(xì)胞膜完整性，只有在完整膜內(nèi)才能維持熒光。也可用于流式分析。
鈣黃綠素(Calcein, AM)是一種對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑，由于在Calcein(鈣黃綠素)的基礎(chǔ)上加強(qiáng)了疏水性，因此能夠輕易穿透活細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞后，Calcein, AM被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Calcein，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF, AM和CFDA)相比，由于Calcein, AM細(xì)胞毒性極低，是適合用于活細(xì)胞染色的熒光探針，而且不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能，如增殖和淋巴球的趨化性。Calcein, AM是用于檢測(cè)細(xì)胞粘附、趨化性和多藥抗藥性的較好的探針。
CellTracker系列產(chǎn)品（包括CellTracker Orange, CellTracker Green, CellTracker Deep Red等）是一類經(jīng)典的熒光示蹤染料。這些染料含有氯甲基集團(tuán)，體外實(shí)驗(yàn)顯示參與GST反應(yīng)，能與硫醇相互作用，在大多數(shù)細(xì)胞中，谷胱甘肽的表達(dá)水平都比較高，并且谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶也隨處可見，因此這種染料添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中，經(jīng)過洗滌進(jìn)入細(xì)胞，能在細(xì)胞中存留多代，并不會(huì)轉(zhuǎn)移到該群的其他細(xì)胞中去（僅有很小可能會(huì)通過縫隙連接轉(zhuǎn)移）。這種探針在熒光染料的細(xì)胞存留能力上實(shí)現(xiàn)了一個(gè)突破，用于移植細(xì)胞和組織的長(zhǎng)時(shí)間示蹤非常理想。
2.細(xì)胞分化和增殖示蹤探針
CFDA, SE具有細(xì)胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動(dòng)運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，可被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE還可自發(fā)性并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時(shí)過量且未被偶聯(lián)的CFDA, SE通過被動(dòng)擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群落分析。
CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀（FL1通道）根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2的熒光強(qiáng)度），二次（1/4的熒光強(qiáng)度），三次（1/8的熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFSA，SE可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可用于成纖維細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測(cè)。
CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，Ex=494nm，Em=521nm，除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。
另外，還可提供CFDA，SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測(cè)試劑盒，試劑盒中包含配制CFDA，SE儲(chǔ)存液所需的溶劑和細(xì)胞標(biāo)記用的染色緩沖液，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作。
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em (nm) |
規(guī)格 |
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40714ES76 |
494/521 |
500T |
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40714ES80 |
494/521 |
1000T |
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40715ES25 |
494/521 |
25mg |
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40719ES50 |
490/515 |
1×50μg |
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40719ES60 |
490/515 |
2×50μg |
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40720ES03 |
490/526 |
1g |
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40720ES08 |
490/526 |
5g |
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40721ES50 |
CellTracker Green CMFDA (5-Chloromethylfluorescein Diacetate) 活細(xì)胞示蹤劑CMFDA（綠色） |
492⁄517 |
1×50μg |
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40721ES60 |
492⁄517 |
2×50μg |
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40721ES72 |
492⁄517 |
5×50μg |
七、細(xì)胞骨架探針
1.微絲（F-actin）探針
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來(lái)源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin?？膳c多種熒光染料偶聯(lián)，如四甲基羅丹明 (TRITC) 、FITC 、iFluor™ 488、iFluor™ 647、iFluor™ 555等，通過標(biāo)記組織切片，細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞體系中的絲狀肌動(dòng)蛋白，從而對(duì)其進(jìn)行定性和定量分析。
該系列產(chǎn)品具有以下特點(diǎn)：
親和力高：Kd= 20 nM；
特異性強(qiáng)：選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin，而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合；
優(yōu)于抗體染色：不同于Actin抗體，鬼筆環(huán)肽無(wú)物種限制性，適用范圍廣；且?guī)缀醪淮嬖诜翘禺愋詤^(qū)域，染色區(qū)和非染色區(qū)域?qū)Ρ刃詷O其明顯；
靈敏度高：納摩爾濃度（nM）染色即可滿足實(shí)驗(yàn)要求；
兼容性好，肌動(dòng)蛋白活力不受影響：鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15Å，分子量＜2000 Da，標(biāo)記后的肌動(dòng)蛋白許多生理特性都得以維持；
適用范圍廣：無(wú)物種差異性；同樣適用于甲醛固定和打孔處理后的組織樣本。
2.G-actin探針
Alexa Fluor® 488標(biāo)記Deoxyribonuclease I選擇性結(jié)合G-actin（球狀），發(fā)明亮的綠色熒光，并可以檢測(cè)固定細(xì)胞中未聚合的肌動(dòng)蛋白（actin）。
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
熒光 |
規(guī)格 |
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40733ES03 |
/ |
1mg |
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40734ES75 |
紅色 |
300T |
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40734ES80 |
1mg |
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40735ES75 |
綠色 |
300T |
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40735ES80 |
1mg |
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40736ES75 |
綠色 |
300T |
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40737ES75 |
橘色 |
300T |
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40762ES75 |
iFluor™ 647 phalloidin iFluor™ 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（遠(yuǎn)紅） |
遠(yuǎn)紅 |
300T |
3.微管 (microtubulin - polymerized tubulin)探針
Tubulin Tracker Green 是不帶電的無(wú)熒光化合物，易于穿過活細(xì)胞的質(zhì)膜。 一旦進(jìn)入細(xì)胞，親脂性封閉基團(tuán)被非特異性的脂酶切割，得到綠色熒光的帶電形式。主要用于對(duì)活細(xì)胞中多聚化的微管蛋白染色。
八、細(xì)胞核染色
1.常用的細(xì)胞核熒光探針
碘化丙啶（PI）是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，是一種溴化乙啶的類似物，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。不可透過完整細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。紅色熒光（Ex=540nm，Em=608nm）。
DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，與雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。DAPI可以透過完整細(xì)胞膜對(duì)DNA染色。藍(lán)色熒光（Ex=364nm，Em=454nm）。
7-氨基放線菌素（7-AAD）是一種細(xì)胞核熒光染料，嵌入雙鏈DNA，不可透過完整細(xì)胞膜，隨著細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡過程，質(zhì)膜對(duì)7-AAD的通透性逐漸增加。廣泛用于FACS，熒光強(qiáng)度雖低于PI，但是適合于FITC，PE同時(shí)檢測(cè)。紅色熒光（Ex=488nm，Em=650nm）。
Hoechst 33258是一種藍(lán)色細(xì)胞核熒光染料，嵌入雙鏈DNA小溝，可以透過完整細(xì)胞膜。嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，根據(jù)正常和凋亡時(shí)期染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的差異。普通細(xì)胞核染色。藍(lán)色熒光（Ex=352nm，Em=461nm）。
Hoechst 33342 是一種藍(lán)色細(xì)胞核熒光染料，嵌入雙鏈DNA小溝，可以透過完整細(xì)胞膜，對(duì)細(xì)胞毒性較低。常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，及普通細(xì)胞核染色。藍(lán)色熒光（Ex=350nm，Em=461nm）。
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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40710ES03 |
1ml |
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40711ES10 |
10mg |
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40711ES60 |
100mg |
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40712ES08 |
5mg |
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40722ES03 |
1mg |
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40724ES10 |
10g |
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40727ES10 |
10mg |
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40728ES03 |
1mg (200μl) |
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40729ES10 |
10mg |
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40729ES76 |
500mg |
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40729ES80 |
1g |
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40730ES03 |
Hoechst 33258 染液（1mg/ml） Hoechst 33258 Stain Solution (1mg/ml) |
1ml |
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40731ES10 |
10mg |
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40732ES03 |
Hoechst 33342 染液（1mg/ml）Hoechst 33342 Stain Solution (1mg/ml) |
1ml |
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40744ES60 |
1KIT（100 T) |
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40745ES64 |
150T |
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40747ES76 |
Calcein-AM/PI 活細(xì)胞/死細(xì)胞雙染試劑盒 Calcein-AM/PI Double Stain Kit |
500T |
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40747ES80 |
1000T |
2.細(xì)胞核定位載體
細(xì)胞核定位載體用于研究重組蛋白在細(xì)胞核（Endoplasmic reticulum）的定位及功能的便利的工具。研究人員可以根據(jù)自己的研究目的選擇相應(yīng)的定位表達(dá)載體，再將感興趣的ORF片段構(gòu)建到表達(dá)載體中進(jìn)行研究。
陽(yáng)性對(duì)照可以表達(dá)GFP，且同樣定位在細(xì)胞核上。
