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      Fluo-4,AM,Cell Permeant 細(xì)胞膜可滲透鈣離子熒光探針
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻
                  
       
      產(chǎn)品簡介
      


       
      


      細(xì)胞生物學(xué)實驗中常使用Fluo-4, AM作為一種熒光探針來檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。其檢測原理基于Fluo-4, AM可穿透細(xì)胞膜進入細(xì)胞，之后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-4游離配體幾乎是非熒光性的，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。但是，當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強的熒光，熒光會增加60至80倍。 
      


      Fluo-4, AM是鈣指示劑Fluo-4, AM的升級版本，主要變化為后者分子上的兩個氯原子被Fluo-4, AM上的氟所取代，該結(jié)構(gòu)上的微小變化使Fluo-4, AM加載更快，在相同濃度下檢測信號更強。
      


       
      


      組分信息
      


       
      


      
	
		
      
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      40704ES50
      
			      		
			
			
      40704ES72
      
			      		
			
			
      40704ES80
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Fluo-4, AM, Cell Permeant 細(xì)胞膜可滲透鈣離子熒光探針
      
			      		
			
			
      50 μg
      
			      		
			
			
      5×50 μg
      
			      		
			
			
       1 mg 
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      產(chǎn)品性質(zhì)
      


       
      


      
	
		
      
			
			
      CAS 號（CAS NO.）
      
			      		
			
			
      273221-67-3
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      分子式（Molecular Fomular）
      
			      		
			
			
      C51H50F2N2O23
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      分子量（Molecular Weight）
      
			      		
			
			
      1096.94
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Ex/Em（nm, Ca2+-bound）
      
			      		
			
			
      494/516
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      純度（Purity）
      
			      		
			
			
      ≥90% (HPLC)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      外觀（Appearance）
      
			      		
			
			
      橙紅色粉末
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      結(jié)構(gòu)式（Structure）
      
			      		
			
			
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      儲存條件
      


       
      


      室溫運輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。
      


       
      


      使用說明
      


       
      


        
	
      1. Fluo-4/AM儲存液的配制
        2. 

      


      利用高質(zhì)量無水DMSO溶解Fluo-4/AM配制成2 - 5 mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長可保存6個月，但是避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。
      


        
	
      1. Fluo-4/AM工作液的配制
        2. 

      


      利用合適緩沖液（如HHBS）將Fluo-4/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。
      


      注：① 對于大多數(shù)細(xì)胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Fluo-4/AM。細(xì)胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗確定。
      


      ② Fluo-4/AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍存。
      


      ③ Pluronic F-127 可以防止Fluo-4/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細(xì)胞。
      


        
	
      1. 取出預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞，除去培養(yǎng)基，使用緩沖液洗滌細(xì)胞3次。 
        2. 

      


      注：如果使用含血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會降低Fluo-4/AM進入細(xì)胞的效果。另外含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養(yǎng)基殘留。 
      


        
	
      1. 將 Fluo-4/AM工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。在37℃培養(yǎng)30 - 60 min。
        2. 
	
      2. 用緩沖液（如HHBS）洗滌細(xì)胞 3 次，以充分去除殘留的Fluo-4/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細(xì)胞。
        3. 
	
      3. 數(shù)字成像顯微鏡檢測細(xì)胞。
        4. 

      


      注：某些細(xì)胞具有自體熒光會影響結(jié)果分析，需使用未加載探針細(xì)胞做對照，在結(jié)果分析時在同一波長下扣除自熒光。
      


       
      


      注意事項
      


       
      


      1. 本產(chǎn)品僅作科研用途。
      


      2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
      


      3. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
      


      4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請確認(rèn)在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底
      


      5. 第一次使用時，建議母液現(xiàn)配現(xiàn)用。且溶解后的試劑盡可能在短時間內(nèi)使用，以保證實驗效果。
      


      6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥保存。
      


      7. 建議您在正式實驗前先摸索一下細(xì)胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到最佳實驗條件。
      


       
      


      Ver.CN20241124
      


       
      

         
       
       
       
       
       
       
       
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