1970年Mandel和Hige發(fā)現(xiàn)大腸桿菌細(xì)胞經(jīng)CaCl2溶液處理時能夠吸收λ噬菌體DNA,細(xì)胞這種能夠吸收DNA的狀態(tài)稱感受態(tài)。使用理化方法誘導(dǎo)細(xì)胞,改變細(xì)胞膜狀態(tài),增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性,細(xì)胞膜表面性狀發(fā)生暫時性改變,方便外源基因或者載體進(jìn)入受體細(xì)胞,這種處于最適攝取和容納外來DNA狀態(tài)的細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞 (competent cell)。感受態(tài)細(xì)胞是基因克隆和蛋白表達(dá)所必備的工具。傳統(tǒng)的感受態(tài),轉(zhuǎn)化效率低,轉(zhuǎn)化時間長。翌圣新款感受態(tài),更快速、更高效。
快速轉(zhuǎn)化與常規(guī)轉(zhuǎn)化有什么不同?
翌圣快速感受態(tài)細(xì)胞效率如何?
翌圣快速感受態(tài)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)推薦?
1.快速轉(zhuǎn)化與常規(guī)轉(zhuǎn)化有什么不同?
快速轉(zhuǎn)化(10 min)操作流程:
快速熱激轉(zhuǎn)化(25 min)操作流程:
常規(guī)轉(zhuǎn)化操作流程:
2.翌圣快速感受態(tài)細(xì)胞效率如何?
從產(chǎn)品數(shù)據(jù)大家可以看到,我們的新款快速感受態(tài),加速不減效。小翌全新上線快速感受態(tài)助您在克隆的路上“快人一步”。
圖1. F -DH5α 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板
A:pFast質(zhì)粒10 min快速轉(zhuǎn)化平板(A-1/A-2為兩個重復(fù));B:pFast質(zhì)粒25 min快速轉(zhuǎn)化平板(B-1/B-2為兩個重復(fù));C:pFast質(zhì)粒常規(guī)轉(zhuǎn)化平板(C-1/C-2為兩個重復(fù))。
A:酶連產(chǎn)物10 min快速轉(zhuǎn)化平板(A-1/A-2為兩個重復(fù));B:酶連產(chǎn)物25 min快速轉(zhuǎn)化平板(B-1/B-2為兩個重復(fù));C:酶連產(chǎn)物常規(guī)轉(zhuǎn)化平板(C-1/C-2為兩個重復(fù))。
3.翌圣快速感受態(tài)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)推薦?
快速感受態(tài)既可以適應(yīng)快速程序又可以適應(yīng)常規(guī)程序,那么在實(shí)際操作時,我們該選用什么程序呢?
一般情況下,快速感受態(tài)細(xì)胞既可以快速轉(zhuǎn)化也可以常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化,對于>7kb質(zhì)粒構(gòu)建,為提高轉(zhuǎn)化效率,可采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
快速感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,轉(zhuǎn)化效率會有所下降,因?yàn)樵诓患尤敕跤襟E的條件下,卡那霉素對于菌體的毒性較大。若要提高卡那霉素或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率,可增加孵育步驟,即選用25 min轉(zhuǎn)化步驟或常規(guī)轉(zhuǎn)化步驟。
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