在使用傳統(tǒng)高保真酶進(jìn)行PCR時(shí),難免會遇到一些棘手的問題。例如保真度不夠,擴(kuò)增得到的片段測序后發(fā)現(xiàn)仍有目的堿基發(fā)生突變或缺失。擴(kuò)增的時(shí)間也相對漫長,有時(shí)擴(kuò)增5kb的片段也要花費(fèi)將近2個(gè)小時(shí)的時(shí)間?,F(xiàn)小翌推出一款快速高保真PCR以解決您的煩惱!--Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (超快速高保真酶預(yù)混液)
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)
保真性高:低錯(cuò)配率,高GC易突變序列中堿基錯(cuò)配比231/300000;
擴(kuò)增速度快:延伸速度快至5 sec/kb;
適用性廣:可覆蓋20-80%GC含量的基因,耐受小鼠裂解物和20%的血液;
穩(wěn)定性好:37℃下存放7d,不影響產(chǎn)品性能;
快速簡便:只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增,帶有上樣染料,可直接電泳;
以不同物種基因組為模板,選取6段GC rich、極易發(fā)生堿基突變/丟失的片段進(jìn)行擴(kuò)增,將各自PCR產(chǎn)物克隆至載體,并對每種序列挑取100個(gè)單克隆進(jìn)行測序以確認(rèn)堿基序列錯(cuò)配/突變情況。結(jié)果顯示快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)發(fā)生堿基錯(cuò)配/突變的比例優(yōu)于國內(nèi)外品牌試劑。
使用快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)和T產(chǎn)品均以5 sec/kb的延伸速度從100 ng人基因組模板擴(kuò)增不同長度片段(0.4-10 kb),延伸時(shí)間均要求為5 sec/kb。結(jié)果顯示,快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)在10kb以內(nèi)的片段均可以5 sec/kb的延伸速度擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
使用快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)從人gDNA模板中擴(kuò)增23-76% GC含量片段,延伸時(shí)間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示,產(chǎn)品擴(kuò)增特異性良好,能兼容不同GC含量片段擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
使用快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)從不同樣本中擴(kuò)增不同長度片段,延伸時(shí)間設(shè)置5-10 sec/kb。結(jié)果顯示本產(chǎn)品擴(kuò)增特異性良好,能兼容不同模板的不同片段擴(kuò)增。
注:1.小鼠gDNA 1 kb;2.小鼠gDNA 2 kb;3.小鼠gDNA 6 kb;4.玉米gDNA 1 kb;5.水稻gDNA 2 kb-A;6.水稻gDNA 2 kb-B;7.人293細(xì)胞cDNA 1 kb;8.人293細(xì)胞cDNA 2 kb ;9.人293細(xì)胞cDNA 3 kb;10.人293細(xì)胞cDNA 12 kb;11.大腸桿菌菌液8 kb;12.大腸桿菌菌液16 kb;13.水稻gDNA 10 kb-A;14.水稻gDNA 10 kb-B;15.水稻gDNA 10 kb-C;16.水稻gDNA 20 kb-A;17.水稻gDNA 20 kb-B;18.人血液直擴(kuò)3 kb。Marker: Yeasen 10510ES
用快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)分別對擬南芥、油菜、馬鈴薯0.5-10 kb 不同GC含量的片段進(jìn)行擴(kuò)增,延伸時(shí)間5 sec/kb,結(jié)果顯示快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)可保證擴(kuò)增。Marker: Yeasen 10510ES。
用快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)分別對擬南芥、油菜、果蠅、秀麗線蟲和斑馬魚中隨機(jī)序列(序列隨機(jī)拉取),0.5-10kb覆蓋20-80%GC含量的片段進(jìn)行擴(kuò)增,延伸時(shí)間5 sec/kb,結(jié)果顯示快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)檢出率高。
使用37℃熱加速放置3 d和7 d的快速高保真酶預(yù)混液(10164ES)分別擴(kuò)增100 ng人基因組中3 kb和5 kb的DNA片段,延伸時(shí)間設(shè)置5 sec/kb。結(jié)果顯示產(chǎn)品具有不錯(cuò)的穩(wěn)定性。Marker: Yeasen 10510ES。
客戶評價(jià):PCR過程速度快,條帶合適,可在瓊脂糖電泳中直接上樣。進(jìn)口N品牌的條帶偏上,可能是自身的buffer影響,且未添加loading buffer,該產(chǎn)品可替代目前我的實(shí)驗(yàn)方案中的高保真酶。
客戶評價(jià):與進(jìn)口T品牌相比,克隆條帶更加清晰單一,整個(gè)PCR時(shí)間也更快,跑膠時(shí)不用再額外加染料,非常方便快捷。
客戶評價(jià):與國產(chǎn)V品牌相比,效果相當(dāng),個(gè)人感覺更佳。
客戶評價(jià):效果很好,條帶清楚。
產(chǎn)品定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
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5s/kb,保真保快(帶電泳染料) |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) |
10164ES |
5s/kb,保真保快(不帶電泳染料) |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix |
10163ES |
83×Taq,檢出率高(帶電泳染料) |
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix(With Dye) |
10154ES |
83×Taq單酶+Buffer分開 |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase |
10153ES |
52×Taq,常規(guī)高保真Mix |
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix |
10149ES |
52×Taq單酶+Buffer分開 |
Hieff Canace® Gold High Fidelity DNA Polymerase |
10148ES |
產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
TA/平末端通用型高效拓?fù)淇寺?/span> |
Hieff Clone® Universal Zero TOPO TA/Blunt Cloning Kit |
20 T |
|
平末端拓?fù)淇寺?/span> |
Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Cloning Kit |
20 T |
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平末端拓?fù)淇寺?,不含多克隆位點(diǎn) |
Hieff Clone® Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit |
20 T |
|
單片段同源重組克隆 |
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit |
20/50 T |
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1-7片段通用同源重組 |
Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit |
20/50 T |
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安全無毒核酸染料 |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) |
500 μL |
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常規(guī)條帶分離 |
Agarose瓊脂糖 |
100 g |