反轉(zhuǎn)錄是將RNA轉(zhuǎn)錄成互補DNA (cDNA) 的過程，該反應由反轉(zhuǎn)錄酶介導完成。在有退火引物的情況下，反轉(zhuǎn)錄酶首先與 RNA 模板結(jié)合。反轉(zhuǎn)酶的RNA依賴性 DNA 聚合酶活性通過摻入反應混合物中的dNTP來合成cDNA，反應生成得到 cDNA:RNA 雜合鏈，此過程被稱為第一鏈 cDNA 合成。

莫洛尼鼠白血病病毒 (M-MLV) 反轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學實驗流程中常見的反轉(zhuǎn)錄酶之一。為了獲得更高的反轉(zhuǎn)錄效率、更好的熱穩(wěn)定性和更高的 cDNA 合成率，通常會對原始的反轉(zhuǎn)錄酶進行基因工程改造。目前市面上的反轉(zhuǎn)錄試劑所需要的反轉(zhuǎn)錄時間普遍從15分鐘到30分鐘不等，時間相對較長，當反應樣本量較大時，整體花費時間量也會急劇上升。翌圣生物現(xiàn)有的5分鐘反轉(zhuǎn)錄系列產(chǎn)品，在5分鐘內(nèi)即可完成反轉(zhuǎn)錄，省時高效。

快速高效高產(chǎn)反轉(zhuǎn)錄預混液(含gDNA去除)(Cat #11155ES)

圖. 分別以人293T細胞RNA、擬南芥RNA、鼠肝RNA和魚肝RNA為模板進行檢測。品牌A、品牌B、品牌C及品牌D均為兩步消化反轉(zhuǎn)錄試劑，反轉(zhuǎn)錄時間在15分鐘-20分鐘不等。測試結(jié)果顯示，11155ES5分鐘反轉(zhuǎn)錄結(jié)果優(yōu)異，產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。

5分鐘一步消化&反轉(zhuǎn)錄預混液(Cat #11151ES)

圖. 以人293T細胞RNA為模板，分別檢測三種基因。品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。

圖. 以擬南芥RNA為模板，品牌A、品牌B、品牌C均為一步gDNA去除&反轉(zhuǎn)錄試劑。測試結(jié)果顯示，在1 μg和10 ng Total RNA 投入下，11151ES反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量均優(yōu)于其他品牌，Ct值更小。

圖. 以人293T細胞RNA為模板，擴增30%GC、50%GC、60%GC和70%GC的基因。分別投入100 pg、1 ng、10 ng、100 ng、1 μg的Total RNA進行反轉(zhuǎn)錄并進行熒光定量檢測。結(jié)果顯示，11151ES可滿足100 pg-1 μg RNA的反轉(zhuǎn)錄。

5分鐘快速反轉(zhuǎn)錄試劑盒(11149/11150ES)

圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES進行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，RNA 投入量為10 pg-1 μg時，11149ES均可反轉(zhuǎn)成功，保證定量結(jié)果。

圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES進行反轉(zhuǎn)錄，將得到的cDNA進行PCR檢測。結(jié)果顯示，11149ES能夠滿足合成1 kb-14 kb長度的cDNA, 后續(xù)PCR有一定的適用場景。若需要直接反轉(zhuǎn)出10kb以上的片段，建議延長反轉(zhuǎn)錄時間至20-30分鐘，以保證最終片段的獲取。

圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES、進口A品牌進行反轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進行gDNA去除步驟，將得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進口A品牌反轉(zhuǎn)時間為13分鐘， 11149ES反轉(zhuǎn)時間為5分鐘，不同產(chǎn)物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進口競品，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進口A品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。

圖. 以293T細胞總RNA為模板，使用11149ES、進口B品牌進行逆轉(zhuǎn)錄，其中11149ES不進行gDNA去除步驟，得到的cDNA 進行qPCR 定量分析。結(jié)果顯示，進口B品牌反轉(zhuǎn)時間為20分鐘，11149ES反轉(zhuǎn)時間為5分鐘，不同量底物定量顯示，11149ES的Ct更小或者接近進口B品牌，說明11149ES 5分鐘反轉(zhuǎn)效率優(yōu)于或近似進口B品牌的反轉(zhuǎn)錄效率。