核酸提取瓶頸不再：直擴(kuò)PCR技術(shù)，高效鎖定目標(biāo)基因
在科研工作中，大家或許都有過(guò)類似經(jīng)歷：面對(duì)一批實(shí)驗(yàn)小鼠，必須依次對(duì)其實(shí)施解剖，精細(xì)分離各種組織器官，繼而提取DNA并經(jīng)過(guò)純化程序，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，直至完成電泳檢測(cè)分析。如此復(fù)雜的流程常常耗時(shí)超過(guò)一天，而這一切努力的目標(biāo)僅僅是確認(rèn)小鼠DNA中是否包含特定目標(biāo)基因。其中，DNA提取和純化步驟堪稱冗長(zhǎng)繁雜。現(xiàn)在有一個(gè)問(wèn)題值得探究：是否有捷徑可以繞過(guò)這些步驟，直接檢驗(yàn)?zāi)繕?biāo)基因呢？這里，小翌為您推薦一項(xiàng)創(chuàng)新的PCR技術(shù)——直擴(kuò)PCR，它能有效地幫助您應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)過(guò)程。
直接PCR（Direct PCR）是一種特殊的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，無(wú)需經(jīng)過(guò)核酸提取純化步驟，即可運(yùn)用植物、動(dòng)物組織、血液等未經(jīng)處理的原始樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增。相較于依賴嚴(yán)格純化核酸的傳統(tǒng)PCR方法，直接PCR摒棄了耗時(shí)的提取階段，極大程度地簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，加快實(shí)驗(yàn)進(jìn)度，并減小了在提取過(guò)程中可能引入的污染風(fēng)險(xiǎn)。其核心技術(shù)特征在于采用了對(duì)樣本內(nèi)抑制物質(zhì)具有極高抵抗性的聚合酶，確保即使在未經(jīng)純化的樣本環(huán)境中，模板DNA也能成功釋放并在PCR反應(yīng)體系中有效擴(kuò)增，從而為DNA擴(kuò)增提供了前所未有的簡(jiǎn)易途徑。
圖1. 直擴(kuò)PCR與傳統(tǒng)PCR技術(shù)比對(duì)圖
翌圣生物研發(fā)的直擴(kuò)PCR系列具有優(yōu)秀的耐受抑制組分，有針對(duì)如動(dòng)物、植物組織等不同樣本的PCR產(chǎn)品，無(wú)需核酸提取純化，助力快速檢測(cè)。從樣本開始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本（圖1-A）或其裂解產(chǎn)物（圖1-B）作為模板，進(jìn)行PCR-based Genotyping（見圖1）。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，直接PCR試劑盒樣本用量少，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)成本低，可高通量化樣本檢測(cè)。
圖2. 直擴(kuò)PCR擴(kuò)增流程圖
A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定；
B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
明星產(chǎn)品推薦
適用樣本：水稻、大豆、玉米、擬南芥等植物的葉片、種子
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：裂解時(shí)間僅需0-10 min
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不同類型植物葉片擴(kuò)增效率高
圖3. 使用Plant Tissue PCR Kit (With Dye)擴(kuò)增不同類型植物葉片結(jié)果。M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。
適用樣本：含EDTA、肝素、檸檬酸鹽等常規(guī)抗凝劑的新鮮血液、冷藏（凍）血液及Whatman903®和FTA®商用干血漬
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：擴(kuò)增速度快，僅需3-10 sec/kb
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擴(kuò)增長(zhǎng)度高達(dá)8 kb
圖4. 使用Blood Advanced Direct PCR Kit直接從人全血中擴(kuò)增不同長(zhǎng)度DNA片段。血樣為-20℃儲(chǔ)存的EDTA抗凝血，血液模板濃度為10%，延伸時(shí)間設(shè)置10 sec/kb。M為10510ES60（Yeasen）。
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耐受性強(qiáng)
圖5 A. 使用Blood Advanced Direct PCR Kit直接從人EDTA抗凝全血中擴(kuò)增2 kb長(zhǎng)度、GC含量71%的DNA片段。血液模板濃度設(shè)置梯度0.5-50%，延伸時(shí)間為10 sec/kb。B. 使用Blood Advanced Direct PCR Kit直接從小鼠EDTA抗凝全血中擴(kuò)增2.2 kb長(zhǎng)度、GC含量67%的DNA片段。血液模板濃度設(shè)置0.5-50%，延伸時(shí)間為10 sec/kb。M為10510ES60（Yeasen）。
適用樣本：小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾等）
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：對(duì)樣本投入量要求低，僅需5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾
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廣泛的模板兼容性
圖6. 使用Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus直接裂解（70℃裂解10 min）擴(kuò)增人293細(xì)胞、唾液、頭皮組織，均有明顯的目的條帶，Marker: 10510ES60 (Yeasen).
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擴(kuò)增速度及產(chǎn)量對(duì)比
1. 質(zhì)粒 10189 1 kb 11. 質(zhì)粒 10189 2 kb
2. T品牌 鼠耳 1 kb 12. T品牌鼠尾 2 kb
3. T品牌鼠尾 1 kb 13. T品牌鼠耳 2 kb
4. T品牌鼠趾 1 kb 14. T品牌鼠趾 2 kb
5-6. 10189 鼠耳 1 kb 15-16. 10189 鼠耳 2 kb
7-8. 10189 鼠尾 1 kb 17-18. 10189 鼠尾 2 kb
9-10. 10189 鼠趾 1 kb 19-20. 10189 鼠趾 2 kb
圖7. 使用Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus和T品牌產(chǎn)品裂解不同組織擴(kuò)增不同大小的目的片段，10189ES延伸速率為5 sec/kb，T品牌延伸速率60 sec/kb。（70℃裂解10 min）
結(jié)論：Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus對(duì)不同組織裂解產(chǎn)物進(jìn)行不同大小的目的片段擴(kuò)增，在快速擴(kuò)增的同時(shí)，均可達(dá)到產(chǎn)品定位的擴(kuò)增效果，尤其是2 kb的擴(kuò)增效果優(yōu)于競(jìng)品。
產(chǎn)品推薦
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產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
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低投入量小鼠組織直擴(kuò)PCR |
Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus |
50 T/200 T |
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小鼠組織直擴(kuò)PCR |
Mouse Tissue Direct PCR Kit(With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒 |
50 T/200 T |
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植物組織直擴(kuò)PCR |
Plant Tissue PCR Kit (With Dye)植物組織直接PCR試劑盒 |
50 T/200 T |
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血液直擴(kuò)PCR，耐受不同抗凝劑 |
Blood Advanced Direct PCR Kit |
50 T/200 T |
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增加PCR反應(yīng)的靈敏度和特異性 |
PCR Enhancer PCR增強(qiáng)劑 |
1 mL |
