想做細胞增殖、細胞成像、流式分析、細胞示蹤、DNA損傷修復、病毒增殖活性檢測觀察怎么辦？ 

免疫法、染料法、同位素法……

免疫法的抗體太貴、染料法染色不清晰、同位素法太危險……

小翌來幫您，EdU系列熒光探針，點亮你的視野，讓你看的更清晰！

背景介紹

測定DNA合成情況是細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復制及修復、信號通路等研究方向常用方法之一，用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU、EdU），兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結合，而EdU因為其特有的炔羥基團可以與一些熒光染料發(fā)生“Click”化學反應，無需變形，從而將細胞標記上熒光，因此應用更廣泛。

EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學結構特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復制的DNA鏈中。

EdU在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click”化學反應（點擊法），從而將增殖的細胞標記上熒光。可用于細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對活體無副作用。

與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU檢測法更簡單、更快速、更準確，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

圖1：EdU滲入DNA分子過程

什么是“點擊法”

基于EdU的點擊法標記技術是由銅催化的疊氮化物-炔烴環(huán)加成反應（圖2），將其應用于細胞的原位標記需兩步過程。首先，其中一個生物反應配體是由疊氮化物或炔烴與“構件”（如核苷酸，核苷，氨基酸，單糖或脂肪酸）連接構成；隨后將另一是由熒光染料、生物素或其他檢測試劑連接的互補炔烴或疊氮化物構成的反應配體在催化劑銅的存在條件下“點擊”到位，完成反應

點擊化學與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測法不同，EdU點擊檢測法不是基于抗體，無需DNA變性即可檢測摻入的核苷。EdU點擊檢測法可以與R-PE、GFP等熒光蛋白復用提高效力，該技術的優(yōu)勢在于化學方面獨特的小分子和低背景的標記物以及檢測基團之間特異性共價反應。小分子的疊氮化物試劑可以有效地接觸DNA而無需對細胞進行破壞處理。進而簡化了測定流程并且獲得的結果與使用傳統(tǒng)的BrdU相似或更好。

圖2：Click-iT EdU點擊法檢測核酸過程

EdU系列產(chǎn)品特點

熒光染料可以在銅離子催化下同EdU發(fā)生“Click”化學反應，將增細胞標記上相關的熒光?？捎糜诩毎上?、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對活體無副作用。

EdU檢測的優(yōu)點：

操作簡單— 僅需EdU孵育；細胞固定化；熒光檢測三步；

檢測快速— 不到3h完成檢測；

結果準確— 標記率高且無需變性，更好地保護細胞形態(tài)；

兼容性高— 允許與多種抗體、熒光染料同時標記；

應用性廣— 細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、病毒增殖活性檢測等。

EdU系列產(chǎn)品檢測結果

Click-iT EdU熒光成像觀察（綠色、紅色、遠紅色)

Click-iT EdU流式細胞儀觀察（綠色、紅色、遠紅色）

 

 

相關產(chǎn)品

 

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格
5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine (EdU) 5‐乙炔基‐2′脫氧尿嘧啶核苷	40284ES50/60/76	50mg/100mg/200mg
5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine (EdU) 5‐乙炔基‐2′脫氧尿嘧啶核苷	40284ES05	2mg
Yefluor 488 EdU Imaging Kit     Yefluor488EdU細胞成像試劑盒(綠色熒光)	40275ES60/76/80	100T/10T 500T/50T 1000T/100T
YF®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（綠色熒光）	40278ES25/50	20T/50T
YF®488 Click-iT EdU Kits（植物細胞）	40287ES60	100T
YF®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（紅色熒光）	40279ES25/50	20T/50T
YF®594 Click-iT EdU Imaging Kits（紅色熒光）	40276ES60/76/80	100T/10T 500T/50T 1000T/100T
YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits（遠紅外色熒光）	40280ES25/50	20T/50T
YF®647A Click-iT EdU Imaging Kits（遠紅外色熒光）	40277ES0/76/80	100T/10T 500T/50T 1000T/100T

 

參考資料

 

1. Chehrehasa F, Meedeniya AC, Dwyer P, Abrahamsen G, Mackay-Sim A. EdU, a new thymidine analogue for labelling proliferating cells in the nervous system. J. Neurosci. Methods. February 2009, 177 (1): 122–30. PMID 18996411. doi:10.1016/j.jneumeth.2008.10.006.

2.Cavanagh, Brenton; Walker, T. Norazit, A. Meedeniya, A. C. Thymidine analogues for tracking DNA synthesis.. Molecules. September 2011 15, 16 (9): 7980–93. PMID 21921870.

3.羅濤, 王彤敏, 李力燕. EdU與BrdU在檢測細胞增殖中的特點及應用進展[J]. 重慶醫(yī)學, 2015(32).

HB20190621