UltraNuclease 全能核酸酶(同Benzonase)及殘留量檢測
UltraNuclease（Benzonase Nuclease） 全能核酸酶，又稱為廣譜核酸酶、非限制性核酸內(nèi)切酶。能夠在多種實驗條件下切割和降解各種形式的DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。
UltraNuclease 生產(chǎn)全程均在GMP生產(chǎn)車間完成，質(zhì)檢方法均嚴(yán)格按照藥典中的方法進行。該酶無蛋白酶活性、不含內(nèi)毒素和任何病毒污染物，適用于各種應(yīng)用場景，可適用于各種生物制品工業(yè)生產(chǎn)過程中殘留核酸的去除。
◎ 降低細胞/細菌裂解時核酸釋放產(chǎn)生的黏度，并且適用于任何裂解方式。
◎ 在大規(guī)模的層析純化時，避免由于大量的核酸吸附在層析介質(zhì)上降低蛋白質(zhì)的有效載量從而降低純化得率。
◎ 在 ELISA、二維電泳和免疫印跡分析中，提高分辨率和回收率。
◎ 消除重組蛋白、疫苗等生物制品的外源性核酸殘留。
◎ 酶的比活≥1.5×106 U/mg（通用底物絕對定量法）
酶活*：在37℃，pH 8.0反應(yīng)條件，2.625 mL反應(yīng)體系中，在30 min內(nèi)使△A260吸收值變化1.0（相當(dāng)于完全消化37 μg鮭魚精DNA成為寡核苷酸）所用的酶量定義為一個活性單位（U）
◎ 酶的純度≥99%（HPLC）
◎ 不同反應(yīng)條件對酶活的影響（部分?jǐn)?shù)據(jù)）
為了探索UltraNuclease最合適的操作條件，我們研究了在多種緩沖體系下對酶活性的影響以下僅展示部分?jǐn)?shù)據(jù)，如需完整數(shù)據(jù)，請聯(lián)系我們。
◎ 儲存及凍融穩(wěn)定性
-20℃儲存8周，酶活無明顯變化；4℃、37℃儲存8周，酶活分別下降約20%和25%。
-80℃~25℃反復(fù)凍融10次，酶活性不受影響。
◎ 質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)符合GMP生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)
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檢測項目 |
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) |
檢測方法 |
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酶活 |
250-300 U/uL |
通用底物法 |
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比活 |
≥1.5×106 U/mg |
通用底物法 |
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蛋白純度 |
≥99% |
SDS-PAGE |
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蛋白酶 |
符合要求 |
通用底物法 |
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細菌內(nèi)毒素 |
符合要求 |
凝膠法 |
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宿主蛋白 |
陰性 |
ELISA法 |
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宿主DNA |
陰性 |
qPCR法 |
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無菌檢測 |
無菌生長 |
通則1101 |
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病原體檢測 |
陰性（不得檢出） |
參照內(nèi)部方法 |
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支原體檢測 |
陰性（不得檢出） |
參照內(nèi)部方法 |
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重金屬檢測 |
符合要求 |
通則0821 |
在正常的純化步驟中，全能核酸酶作為雜質(zhì)很容易被去除。為了檢測全能核酸酶的殘留，翌圣研發(fā)了配套的UltraNuclease ELISA kit，能夠準(zhǔn)確檢測樣本中全能核酸酶的殘留量，該試劑盒在線性、重復(fù)性、回收率及特異性等方面均表現(xiàn)穩(wěn)定。
◎ 線性范圍：0.047~3 ng/mL，R2＞0.99
◎ 批次間重復(fù)性好
在樣本中加入固定濃度的UltraNuclease，用3個不同批次的ELISA試劑盒進行檢測，在核酸酶濃度3~0.186 ng/mL之間，檢測回收率均在70%~110%之間，CV＜10%。
◎ 模擬樣本回收率
對于不同濃度UltraNuclease核酸酶樣本回收率均在70%~130%之間，且優(yōu)于其他品牌。
◎ 特異性強
我們評估了全能核酸酶抗體與8種常見樣本的非特異性結(jié)合，干擾組與對照組結(jié)果重合，未見干擾。
* 表示與陰性相比有顯著性差異；NS：表示與陰性結(jié)果無顯著差異
◎ 在哪一步中加入 UltraNuclease？
這取決于您處理的樣本。在病毒純化時，一般在病毒澄清后加入；大腸桿菌蛋白純化時，可以在菌體裂解時就加入；在處理細胞結(jié)團問題時，可以直接加入培養(yǎng)基中與細胞共培養(yǎng)。
◎ 如果反應(yīng)溫度無法達到37℃，該如何使用？
UltraNuclease的酶活性受到溫度、處理時間、酶活單位的影響，如果溫度無法達到37℃，可以適當(dāng)添加酶的用量，或者延長孵育時間。
◎ UltraNuclease是否與蛋白酶抑制劑兼容？
可以兼容，但需要注意的是許多蛋白酶抑制劑含有EDTA。EDTA 開始高于1mM時，EDTA將抑制部分核酸酶的活性。
◎ 如何去除 UltraNuclease？
可通過 TFF、透析及色譜柱等方法將其去除。
◎ UltraNuclease ELISA kit可否用于其他品牌全能核酸酶殘留的檢測？
我們不建議這樣做。ELISA kit 完全是基于UltraNuclease開發(fā)，能夠?qū)ltraNuclease進行準(zhǔn)確定量。其他品牌的全能核酸酶在序列、生產(chǎn)工藝等方面可能與UltraNuclease有所不同，檢測結(jié)果可能不準(zhǔn)確。
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產(chǎn)品定位 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。 |
20156ES25 /50/60 |
25KU/50KU /100 KU |
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20157ES25/60 /80/90 |
25KU/100 KU /1MU/5MU |
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檢測UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶的殘留 |
36701ES59 |
96T |
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在500 mM鹽濃度條件下仍然有很高活性，廣泛用于高鹽樣本中殘留核酸的去除 |
20159ES25/50/ 60/80/90 |
25KU/50KU /100 KU/1MU/5MU |
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檢測Salt Active UltraNuclease耐高鹽全能核酸酶殘留 |
36703ES48/96 |
48T/96T |
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