Salt Active UltraNuclease GMP-grade（耐高鹽全能核酸酶）是一種來源于海洋微生物的重組非特異性核酸內(nèi)切酶，與UltraNuclease相比在0.5M NaCl條件下具有最佳活性，廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中，有效去除核酸污染。

本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表達(dá)純化，不僅可在科學(xué)研究中降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究；還可以應(yīng)用在病毒純化、疫苗生產(chǎn)、蛋白和多糖類制藥工業(yè)作為宿主殘留核酸去除試劑，將宿主殘留核酸降至皮克（pg）級(jí)別從而提高生物制品功效和安全性；并且可以有效防止細(xì)胞治療和疫苗研究中人外周血單核細(xì)胞（PBMC）的結(jié)團(tuán)。

本品以無(wú)菌液體酶的形式提供，儲(chǔ)存于緩沖液（25 mM Tris-HCl，5 mM MgCl₂，500 mM NaCl，50% Glycerol，pH 7.5）中，無(wú)色透明液體。

產(chǎn)品性質(zhì)

來源	E. coli
分子量（Molecular Weight）	24.7 kDa
等電點(diǎn)	9.61
純度（Purity）	≥ 99%
酶活（Enzyme Activity）	250-300 U/μL
溫度（Optimum Temperature）	37℃（工作范圍0-42℃）
輔助因子（Cofactor）	1-10 mM Mg2+
儲(chǔ)存緩沖液（Storage Buffer）	25 mM Tris-HCl，5 mM MgCl2，500 mM NaCl，50% Glycerol，pH 7.5
活性單位定義（Unit Definition）	一定條件下，在底物過量時(shí) 37℃ ，30 min 內(nèi) 260 nm 處吸光值變化 1.0 所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。

 

運(yùn)輸和保存方法

干冰運(yùn)輸。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。若是打開包裝后并4℃放置超過一周，建議過濾除菌防止微生物污染。

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

1、樣本準(zhǔn)備

貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞，去除上清。

懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用PBS清洗細(xì)胞，6,000 rpm 離心10 min，收集沉淀。

大腸桿菌：離心收集菌體，用PBS清洗1次，8,000 rpm 離心5 min，收集沉淀。

2、樣品處理

將收集到的細(xì)胞沉淀按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比1：(10~20) 的比例進(jìn)行裂解處理，也可通過在冰上或室溫通過機(jī)械或化學(xué)方法裂解細(xì)胞（1 g細(xì)胞約為10⁹個(gè)）。

3、酶的添加

1. 添加適量MgCl₂將反應(yīng)體系中的Mg²⁺ 濃度調(diào)整在1-5 mM范圍內(nèi)，將pH調(diào)整成7.5-9。

2．按照250 Units消化1 g細(xì)胞沉淀的比例添加Salt Active UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以自行選定添加方案，在一定范圍內(nèi)增加酶量，消化所需時(shí)間相應(yīng)減少。

【注】耐高鹽全能核酸酶的酶活受離子濃度、反應(yīng)溫度及pH等因素的影響，初次使用時(shí)建議摸索最適濃度。

4、上清獲取

以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心30min獲得細(xì)胞裂解液上清，再進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

【注】若溶液偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

HB220922