凝膠過濾層析(Gel Filtration Chromatography)也稱為分子篩或體積排阻層析(Size Exclusion Chromatography)，是根據(jù)分子大小和形狀的差異進(jìn)行分離的一種簡單可靠的層析技術(shù)。凝膠過濾層析屬于非吸附類層析。

凝膠過濾填料為三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，由于凝膠網(wǎng)孔大小的限制，大分子將不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部（即被凝膠排阻在外），僅能在凝膠顆粒間隙移動，并隨緩沖液一起從柱底先行洗脫。小分子可以自由進(jìn)入并擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)部，小分子歷經(jīng)的路徑更長，將較晚從柱上洗脫。

由于樣品混合物中各組分的分子大小各異，進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部的程度不盡相同，故經(jīng)歷一段時間的流動并達(dá)到動態(tài)平衡后，即可按分子由大到小的順序先后洗脫出來。典型的SEC結(jié)果如圖1所示：

圖1.SEC分離結(jié)果

1959年第一代的葡聚糖凝膠問世，開啟了凝膠過濾純化的大門。隨著技術(shù)和原料的革新，相繼推出了瓊脂糖系列填料及高度交聯(lián)的瓊脂糖和葡聚糖系列填料。不同凝膠過濾填料的特征如下圖所示：

圖2.凝膠過濾介質(zhì)類別及特征

Dextran是早期發(fā)現(xiàn)的一類填料，可替代GE的Sephadex 系列，目前一般主要用于脫鹽與緩沖液置換。上樣體積可達(dá)柱床體積的25-30%，柱床高度一般2-30cm。

1）比透析速度更快、樣品損失大幅降低

2）平行處理大量樣品，通量更高

3）簡單易用

樣品：BSA蛋白高鹽溶液

上樣量：1ml

圖3.Desalting Column G25 M脫鹽峰圖

Geldex PG是目前分辨率、選擇性最高的凝膠過濾填料，廣受用戶的歡迎?？商娲鶪E的Superdex系列。廣泛應(yīng)用于重組蛋白或天然蛋白的精細(xì)純化階段。此應(yīng)用上樣體積一般為柱體積的1-5%，且柱床高度要求≥60cm。

1）高分辨率、高選擇性

2）高化學(xué)穩(wěn)定性

3）非特異性吸附低

4）流速快、硬度大

5）回收率高

6）易于放大

樣品：IgG（150KD）、牛血清白蛋白（66.4KD）、樣品20（35KD）3個的蛋白抗體混合溶液3ml，濃度3.175mg/ml。

平衡緩沖液：PBS緩沖液。

圖4.翌圣Geldex 75 PG Chromatography Column純化峰圖

圖5.進(jìn)口某品牌對照產(chǎn)品純化峰圖

圖6：國內(nèi)其他品牌對照產(chǎn)品純化峰圖

YXK16/26層析空柱是為廣大用戶精心設(shè)計的實驗室型低壓層析空柱，能方便的連接到 AKTA 等層析系統(tǒng)上。此規(guī)格的空柱常用于凝膠層析介質(zhì)的裝填。

1）使用方便、操作容易；

2）倒翻口接口設(shè)計以及高彈性密封圈有效防止?jié)B漏；

3）柱頭液流分布均勻，容易裝出高柱效的層析柱；

4）外配有恒溫夾套，方便層析過程的溫度控制。
 

16/26裝柱器是YXK16/26層析柱的一個配件，常用于凝膠層析介質(zhì)的裝填，讓裝柱更簡便。