產(chǎn)品簡介

ArCas12a核酸內(nèi)切酶，源自Agathobacter rectalis細(xì)菌的CRISPR系統(tǒng)，別名Cpf1，是一個包含1263個氨基酸的單體蛋白。作為CRISPR/Cas系統(tǒng)的II類（V型）成員，ArCas12a僅由單一的效應(yīng)蛋白行使功能，其特性與Cas9存在顯著差異,例如靶向富含T的基序、不需要反式激活crRNA、DNA雙鏈斷裂產(chǎn)生粘性末端、參與RNA加工、具有DNA核酸酶活性等。

Cas12a缺乏HNH結(jié)構(gòu)域，可單獨利用其RuvC結(jié)構(gòu)域在CRISPR RNA（crRNA）引導(dǎo)下識別位于靶標(biāo)核酸5’端富含胸腺嘧啶（T）的PAM區(qū)而啟動對靶標(biāo)DNA的切割，已成功用于許多哺乳動物和植物的基因組編輯。此外Cas12a還具有反式切割活性，可不加選擇地切割反應(yīng)體系中的非靶標(biāo)單鏈DNA。

與其它LbCas12a/AsCas12a相比，ArCas12a具有更高的溫度適應(yīng)性（25-55℃），可適用于基因組編輯及核酸檢測等。

 

產(chǎn)品信息

貨號	14702ES65 / 14702ES80
規(guī)格	100 pmol / 1000 pmol
來源	大腸桿菌表達(dá)的來源于Agathobacter rectalis的Cpf1基因
分子量	149 KDa
PAM區(qū)	TTTN或TTTV
酶保存液	20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.5 @25℃
反應(yīng)條件	50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2 , pH 7.9 @25℃
濃度	10 µM*
純度	>95%（SDS-PAGE）
失活條件	85℃，5-10 min

*: ArCas12a Nuclease濃度為10 μM，即10 pmol/μL。

 

組分信息

組分編號	組分名稱	14702ES65	14702ES80
14702-A	ArCas12a Nuclease (10 μM)	10 μL	100 μL
14702-B	10×ArCas12a Reaction Buffer	1 mL	1 mL

 

產(chǎn)品應(yīng)用

1. CRISPR/Cas基因編輯；

2. 基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的診斷和檢測；

3. 聯(lián)合核酸等溫擴(kuò)增技術(shù)（RPA和LAMP)的其他檢測應(yīng)用等。

 

儲存條件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用說明

1. 推薦配置應(yīng)用反應(yīng)與體系：

組分	體積
10×Arcas12a Reaction Buffer	3 μL
300 nM crRNA	3 μL (30 nM final)
1 μ MArcas12a Nuclease	1 μL (30 nM final)
Reaction volume	27 μL
30 nM substrate DNA	3 μL (3 nM final)
Nuclease-free water up to	30 μL

2. 在37℃下孵育1小時，然后在85℃下進(jìn)行5-10分鐘以滅活Arcas12a Nuclease，隨后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳以進(jìn)行片段分析。

 

注意事項

1. 為防止RNase污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。

2. 避免反復(fù)凍融。首次溶解之后，建議按照使用量分裝保存。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

4. 本產(chǎn)品僅作科研用途。

 

Ver.CN20240318