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      Hieff UNICON? ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)
       
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      產(chǎn)品說明書
                  
      FAQ
                  
      COA
                  
      已發(fā)表文獻(xiàn)
                  
       
      產(chǎn)品簡介
      


       
      


      Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox) 是2×實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增的預(yù)溶液，具有熒光強(qiáng)度高，靈敏度高和特異性強(qiáng)，擴(kuò)增產(chǎn)量高等特點(diǎn)。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動，可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴(kuò)增。同時(shí)配方添加了提升PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。該產(chǎn)品利用不同染料的混合變色反應(yīng)來監(jiān)控移液操作，有效降低了移液誤差的發(fā)生。 
      


       
      


      組分信息
      


       
      


      
	
		
      
			
			
      組分編號
      
			      		
			
			
      組分名稱
      
			      		
			
			
      11189ES03
      
			      		
			
			
      11189ES08
      
			      		
			
			
      11189ES60
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      11189-A
      
			      		
			
			
      Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
			
			
      5×1 mL
      
			      		
			
			
      100×1 mL
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      11189-B
      
			      		
			
			
      10×Dilution Buffer
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
			
			
      1 mL
      
			      		
			
			
      20×1 mL
      
			      		
		
      
	      

      


       
      


      儲存條件
      


       
      


      -25~-15℃避光保存，有效期1年。
      


       
      


      使用說明
      


       
      


        
	
      1. Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix 中包含藍(lán)色染料，10×Dilution Buffer為專用黃色濃縮模板稀釋液。使用過程中，如需要進(jìn)行模板示蹤，則需稀釋到1X作為模板稀釋液使用，然后進(jìn)行qPCR檢測；如不需要進(jìn)行模板示蹤，則不使用Dilution Buffer即可。
        2. 

      


      
	
		
      
			
			
      模板類型
      
			      		
			
			
      10×Dilution Buffer使用方式*
      
			      		
			
			
      Dilution Buffer 終濃度
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      cDNA溶液、已溶解的質(zhì)粒、基因組
      
			      		
			
			
      若要稀釋模板，則先使用無菌超純水將模板稀釋至目標(biāo)濃度，后在每9 μL模板中加入1 μL 10×Dilution Buffer。
      
			      		
			
			
      1×
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      未溶解的DNA粉末
      
			      		
			
			
      使用無菌超純水將10×Dilution Buffer 稀釋至1×，使用合適體積的1×Dilution Buffer作溶劑溶解對應(yīng)的DNA粉末。
      
			      		
			
			
      1×
      
			      		
		
      
	      

      


      *實(shí)際使用過程中也可按需使用其他方案，保證最終模板中Dilution Buffer濃度為1×即可。
      


        
	
      1. 推薦qPCR反應(yīng)體系
        2. 

      


      
	
		
      
			
			
      組分
      
			      		
			
			
      體積 （μL）***
      
			      		
			
			
      體積 （μL）***
      
			      		
			
			
      終濃度
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Hieff UNICON® ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox)
      
			      		
			
			
      25
      
			      		
			
			
      10
      
			      		
			
			
      1×
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Forward Primer (10 μM)*
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
			
			
      0.4
      
			      		
			
			
      0.2 μM
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      Reverse Primer (10 μM)*
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
			
			
      0.4
      
			      		
			
			
      0.2 μM
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      模板DNA/cDNA**
      
			      		
			
			
      x
      
			      		
			
			
      x
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      無菌超純水
      
			      		
			
			
      Up to 50
      
			      		
			
			
      Up to 20
      
			      		
			
			
      -
      
			      		
		
      
	      

      


      *通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
      


      **如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10，最佳模板加入量以保證擴(kuò)增得到的Ct值在20-30個(gè)循環(huán)為宜。
      


      ***推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性；上機(jī)前需充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
      


        
	
      1. 反應(yīng)程序
        2. 

      


      
	
		
      
			
			
      循環(huán)步驟
      
			      		
			
			
      溫度
      
			      		
			
			
      時(shí)間
      
			      		
			
			
      循環(huán)數(shù)
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      預(yù)變性
      
			      		
			
			
      95℃
      
			      		
			
			
      2 min
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      變性
      
			      		
			
			
      95℃
      
			      		
			
			
      10 sec
      
			      		
			
			
      40
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      退火/延伸*
      
			      		
			
			
      60℃
      
			      		
			
			
      30 sec**
      
			      		
		
      
		
      
			
			
      熔解曲線階段*
      
			      		
			
			
      儀器默認(rèn)設(shè)置
      
			      		
			
			
      1
      
			      		
		
      
	      

      


      *退火溫度和時(shí)間：請根據(jù)引物TM值和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。
      


      **熒光信號采集：請勿忘記打開熒光信號采集，按照儀器使用說明書要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)程序設(shè)置。
      


      ***熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
      


       
      


      適用機(jī)型
      


       
      


      本產(chǎn)品中預(yù)混了用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差的ROX Reference Dye 2 (低濃度)，適用于以下熒光定量PCR儀：Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P；以及其他需要添加低濃度ROX Reference Dye的熒光定量PCR儀。
      


       
      


      引物設(shè)計(jì)指南
      


       
      


        
	
      1. 推薦引物長度25 bp左右。擴(kuò)增產(chǎn)物長度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
        2. 
	
      2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
        3. 
	
      3. 引物堿基分布均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個(gè)相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個(gè)堿基最好為G或C。
        4. 
	
      4. 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個(gè)堿基以上的互補(bǔ)序列。
        5. 
	
      5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對。避免引物 3’端有2個(gè)堿基以上的非特異性互補(bǔ)。
        6. 
	
      6. 設(shè)計(jì)完成的引物需要進(jìn)行擴(kuò)增效率的檢測，只有具備相同擴(kuò)增效率的引物才可用于定量比較分析。
        7. 

      


       
      


      注意事項(xiàng)
      


       
      


        
	
      1. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
        2. 
	
      2.  解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
        3. 
	
      3.  使用前請上下顛倒以混勻Master Mix，請勿vortex避免產(chǎn)生氣泡，影響定量結(jié)果。Master Mix經(jīng)混勻短暫離心后即可使用。加樣過程中吹打要輕，如果操作不慎Master Mix起泡，需再次離心方可使用。
        4. 
	
      4.  由于本品檢測靈敏度極高，易被空氣中氣溶膠污染。因此反應(yīng)體系配制時(shí)請于超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行，配制過程中請使用滅菌槍頭、反應(yīng)管，條件容許的實(shí)驗(yàn)室推薦使用專用的移液槍和帶濾芯的槍頭。
        5. 
	
      5. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號：11155ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
        6. 
	
      6. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
        7. 

      


       
      


      Ver.CN20241016
      

         
       
       
       
       
       
       
       
      400-6111-883