產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
酶切點(diǎn)位
5'-AT↓CGAT-3'
3'-TAGC↑TA-5
產(chǎn)品描述
FuniCut™系列內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術(shù)，可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶，適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA等。FuniCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應(yīng)體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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15007-A |
FuniCut™ ClaI |
50 μL |
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15007-B |
10×FuniCut™ Buffer |
1 mL |
|
15007-C |
10×FuniCut™ Color Buffer |
1 mL |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20°C保存，有效期2年。
識別位置
5'-AT↓CGAT-3'
3'-TAGC↑TA-5'
推薦反應(yīng)條件
1× FuniCut™ 緩沖液；
最適37°C孵育。
失活條件
80°C孵育20 min。
注意事項(xiàng)
1）3 h孵育未表現(xiàn)星號活性，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性；
2）受Dam甲基化影響，序列可能重疊，剪切阻斷；
3）受CpG甲基化影響，序列完全重疊，剪切阻斷；
4）受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切可能受影響；
5）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作；
6）本產(chǎn)品僅作科研用途！
質(zhì)量控制
1. 功能活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，在20 μL反應(yīng)體系中，1 μL酶能夠在15 min內(nèi)完全消化1 μg λDNA (Dam-)。
2. 超長時(shí)間孵育檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA (Dam-)共孵育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，但延長孵育時(shí)間可能出現(xiàn)星號活性。
3. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應(yīng)溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產(chǎn)物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產(chǎn)物重新連接，將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
4. 非特異性內(nèi)切酶活性檢測：最適反應(yīng)溫度下，將1 μL酶與1 μg超螺旋質(zhì)粒DNA共同孵育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
5. 藍(lán)白斑檢測：將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化，重新連接后轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，涂布在含有對應(yīng)抗生素、IPTG和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍(lán)色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于FuniCut™系列限制酶而言，白色菌落比例應(yīng)小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建議的加樣順序配制體系反應(yīng)液（冰上操作）：
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組分 |
質(zhì)粒DNA |
PCR產(chǎn)物 |
基因組DNA |
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ddH2O |
15 μL |
16 μL |
30 μL |
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10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer |
2 μL |
3 μL* |
5 μL |
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底物DNA |
2 μL（~1 μg） |
10 μL (~0.2 μg) |
10 μL (5 μg) |
|
FuniCut™ ClaI |
1 μL |
1 μL |
5 μL |
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Total |
20 μL |
30 μL |
50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強(qiáng)度，10×FuniCut TM Buffer加入量可適當(dāng)減少至2 μL。若下一步進(jìn)行克隆等實(shí)驗(yàn)，酶切前需純化PCR產(chǎn)物。
2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴。
3）37°C孵育15 min（質(zhì)粒），或15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或30~60 min（基因組 DNA）。
4）80°C孵育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。
2. 雙酶切或多酶切
1）每種內(nèi)切酶的用量為1 μL，并根據(jù)需要適當(dāng)擴(kuò)大反應(yīng)體系。
2）所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的1/10。
3）如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進(jìn)行孵育。
3.質(zhì)粒的擴(kuò)大反應(yīng)體系
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組分 |
體積（20 μL） |
體積（20 μL） |
體積（50 μL） |
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DNA |
1 μg |
2 μg |
5 μg |
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FuniCut™ ClaI |
1 μL |
2 μL |
5 μL |
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10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer |
2 μL |
2 μL |
5 μL |
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Total |
20 μL |
20 μL |
50 μL |
【注】：如果總反應(yīng)體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時(shí)間。
不同DNA中的識別位點(diǎn)數(shù)
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λDNA |
ΦX174 |
pBR322 |
pUC57 |
pUC18/19 |
SV40 |
M13mp18/19 |
Adeno2 |
|
15 |
0 |
1 |
0 |
0 |
0 |
2 |
2 |
甲基化修飾影響
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Dam |
Dcm |
CpG |
EcoKI |
EcoBI |
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序列可能重疊 剪切阻斷 |
無影響 |
序列完全重疊 剪切阻斷 |
無影響 |
序列可能重疊 剪切可能受影響 |
不同反應(yīng)緩沖液中的活性
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反應(yīng)緩沖液 |
FuniCut™ Buffer |
Thermo Scientific FastDigest Buffer |
NEB CutSmart® Buffer |
Takara QuickCut™ Buffer |
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活性 |
100% |
100% |
100% |
100% |
【注】：活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。
同裂酶
BspDI，BanIII，Bsa29I，BseCI，BshVI，BsiXI，Bsp106I，BspXI，Bsu15I，BsuTUI，ZhoI
【注】：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
keywords: ClaI、Cla I、Cla i、Cla1、Cla 1、ClaⅠ、Cla Ⅰ、Cla
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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11801ES80 |
10×100 μL |
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11802ES80 |
10×100 μL |
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10148ES60 |
100 U |
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10149ES03 |
1 mL |
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10912ES10 |
10 T |
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11003ES10 |
10 T |
HB211123
