Hifair^® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR是Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)的升級版，可在同一管中進行逆轉錄和基因組去除兩個反應，操作簡便，可有效降低復雜加樣過程造成的樣品污染和RNA降解的風險。本產品中5×Hifair^® One Step RT SuperMix中含逆轉錄反應所需的全部試劑（Hifair^® V Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, Oligo(dT)₁₈ Primer, Random Primer, dNTPs, Buffer)，反應時只需加入gDNA Remover Mix、模板RNA和水即可高效地合成第一鏈cDNA，同時去除基因組DNA污染。另外，本產品提供了5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置無逆轉錄酶的對照，判斷qPCR模板是否來自cDNA。

本產品中的Hifair^® V Reverse Transcriptase可耐受高達60°C的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。逆轉錄產物兼容探針法與染料法qPCR，探針法與染料法qPCR Mix分別推薦翌圣Hieff Unicon^® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211)和Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184)，進行高性能基因表達分析。

 

產品組分

組分編號	組分名稱	產品規(guī)格
		11142ES10 (10 T)	11142ES60 (100 T)
11142-A	5×Hifair® One Step RT SuperMix	40 μL	400 μL
11142-B	gDNA Remover Mix	10 μL	100 μL
11142-C	5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix	20 μL	40 μL
11142-D	RNase free H2O	1 mL	2×1 mL

 

產品應用

后續(xù)適用于qPCR實驗。

 

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20°C保存，有效期12個月。

 

注意事項

1）所有操作均應在冰上進行，且操作過程應避免RNase污染。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3）本產品僅作科研用途！

 

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. 反應體系配置：在冰上融化11142-A/B/C組分，將試劑各組分充分震蕩混勻，并在RNase-free離心管中配置如下體系：

組分	使用量
RNase-free H2O	To 20 μL
5×Hifair® One Step RT SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

No-RT Control反應（可選）

5×Hifair^® One Step No-RT Control SuperMix，用于配置無逆轉錄酶的對照，判斷qPCR模板是否來自cDNA。

組分	使用量
RNase-free H2O	To 20 μL
5×Hifair® One Step No-RT Control SuperMix	4 μL
gDNA Remover Mix	1 μL
Total RNA	10 ng-1μg

 

2. 輕輕混勻，按照如下程序進行逆轉錄

溫度	時間
30°C	5 min
55°C	15 min
85°C	5 min

【注】：1. 逆轉錄溫度：推薦使用55°C。對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到60°C。

2. 逆轉錄產物可立即用于后續(xù)qPCR反應，也可-20°C短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80°C保存，避免反復凍融。

HB221019