產(chǎn)品說明書
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已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品描述
2× Hieff Canace® PCR Master Mix是即用型2×預(yù)混合溶液，包含Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶，具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴(kuò)增速度可達(dá)15 sec/kb。適用于復(fù)雜模板的擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端。
2× Hieff Canace® PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)體系只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，簡化了實(shí)驗(yàn)操作步驟，減少了人為誤差，提高了實(shí)驗(yàn)通量和結(jié)果的重復(fù)性。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer 后進(jìn)行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護(hù)劑，使得預(yù)混液反復(fù)凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。
產(chǎn)品應(yīng)用
基因克??；復(fù)雜DNA模板擴(kuò)增；高通量建庫。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
2）本產(chǎn)品僅作科研用途！
推薦PCR反應(yīng)體系（冰上配制）
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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ddH2O |
to 50 μL |
- |
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DNA模板 |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
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2× Hieff Canace® PCR Master Mix |
25 μL |
1× |
【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預(yù)混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應(yīng)體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預(yù)混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴(kuò)增。
5）不同模板的推薦使用量（50 μL反應(yīng)體系）：
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模板種類 |
擴(kuò)增片段1 kb-20 kb |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質(zhì)?；虿《綝NA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超過PCR反應(yīng)總體積的1/10) |
PCR擴(kuò)增程序設(shè)置
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循環(huán)步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
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預(yù)變性 |
98℃ |
0.5-3 min |
1 |
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變性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
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退火 |
60℃ |
20 sec |
|
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延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
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終延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1）預(yù)變性溫度和時間：推薦使用98℃。預(yù)變性推薦時間：質(zhì)粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間推薦如下：質(zhì)粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復(fù)雜模板為30 sec/kb，根據(jù)實(shí)際情況可延長至40 sec/kb。
4）擴(kuò)增產(chǎn)物：請將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，產(chǎn)物直接用于克隆，請使用平末端連接載體。
應(yīng)用實(shí)例
圖1： Hieff Canace® 高保真PCR預(yù)混液擴(kuò)增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可實(shí)現(xiàn)高特異性、高產(chǎn)量擴(kuò)增。模板：擬南芥基因組DNA，50 ng/50 μL；退火溫度：60℃；延伸時間：30 sec/kb。M：1 kb ladder； 1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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10135ES60/76/80 |
100/500/1000 U |
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10907ES20 |
20 T |
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10908ES20 |
20 T |
|
|
10909ES20 |
20 T |
|
|
10910ES20 |
20 T |
|
|
10911ES20 |
20 T |
|
|
10912ES10 |
10 T |
|
|
11003ES10 |
10 T |
|
|
11004ES10 |
10 T |
HB210831
