Hieff? high purity exosome?isolation?kit(for Serum/Plasma) 高純度血清/血漿外泌體抽提試劑盒
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產(chǎn)品說明書
FAQ
COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
Exosome（外泌體）是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中。Exosome攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等重要信息，不僅在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用，更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。該血清/血漿外泌體快速提取純化試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于血清/血漿中的外泌體提取，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。本試劑盒采用獨(dú)特的分離技術(shù)，可以快速從血清/血漿中獲得大量完整的外泌體顆粒，適用于下游的細(xì)胞共培養(yǎng)、電鏡分析、Western Blot、熒光定量（qPCR）和高通量測序等應(yīng)用。
產(chǎn)品組分
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編號(hào) |
組分 |
規(guī)格 |
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41216-A |
Solution P1（-25~-15℃保存） |
20mL |
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41216-B |
Solution P2（室溫保存） |
5mL |
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41216-C |
Exosome Purification Column（室溫保存） |
20個(gè) |
運(yùn)輸和保存方法
收到產(chǎn)品后將試劑分開儲(chǔ)存，使用前請(qǐng)充分混勻。
Solution P1：室溫運(yùn)輸，打開試劑盒后儲(chǔ)存于-25~-15℃條件下（常規(guī)冰箱冷凍層）；
Solution P2：室溫保存；
Exosome Purification Column：室溫保存。
注意事項(xiàng)
1、使用前請(qǐng)將外泌體抽提試劑（41216-A）充分混勻。
2、產(chǎn)品只針對(duì)血清/血漿樣本，不適用其它體液或者是細(xì)胞培養(yǎng)上清中外泌體的抽提；如果需要進(jìn)行細(xì)胞上清外泌體分離，
請(qǐng)選用細(xì)胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒。
3、如果想要進(jìn)一步純化外泌體，可以使用相應(yīng)抗體包被的磁珠進(jìn)行親和純化。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5、本產(chǎn)品僅作科研用途！
操作方法
一、樣品預(yù)處理：
1、離心機(jī)在使用前先于 4℃預(yù)冷 10 min；
2、取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于 2-8℃條件下進(jìn)行解凍待完全融化后置于冰上待用；如果是新鮮樣品，置于冰上待用；
3、將樣品按照 500 μL /管進(jìn)行分裝，不足部分用 1×PBS補(bǔ)足至500μL（單管處理體積）。
二、去除雜蛋白
1、取出Solution P1 放冰箱預(yù)冷10min ，置于冰上預(yù)冷；
2、在 500 μL 血液樣品中 加入400μL 預(yù)冷的 Solution P1，立即將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器充分混勻 30s;
3、將混勻后的樣品于 4℃以 12000 rpm 離心 20 min，雜蛋白沉淀后，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL離心管中；
三、外泌體提取
1、在上清液中加入 120 μL 的 Solution P2，離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器充分混勻 2 min；再放置于室溫下靜置 5 min；
2、將裝有混合液的離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 15 min，棄上清；
3、重復(fù)步驟2（注：盡可能吸凈上清液），并將 1.5 mL 離心管于室溫下敞口靜置 10 min；
4、取 200 μL 的 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5 mL 離心管中；
5、將含有重懸液的 1.5 mL離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 5 min，保留上清液，該上清液中富含外泌體顆粒；（注：此時(shí)可能有較多沉淀，為正?，F(xiàn)象）
四、純化外泌體
1、將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Column（純化柱）上室中，于 4℃以 5600 rpm 離心 20 min，離心后收集純化柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒；（注：純化柱不可重復(fù)使用）。
2、純化后的外泌體以50-100 μL 進(jìn)行分裝保存于-80℃低溫冰箱中，以備后繼實(shí)驗(yàn)使用。
五、外泌體除菌（可選）：
獲得的外泌體后期需要與細(xì)胞共培養(yǎng)，可以使用0.22 μm的濾器進(jìn)行過濾除菌。初次嘗試時(shí)，外泌體濃度在10-100 μg/mL內(nèi)做梯度摸索，選擇一個(gè)較為合適的條件。
HB230210
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