Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
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COA
已發(fā)表文獻(xiàn)
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號(hào) |
規(guī)格 |
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Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒 |
40754ES60 |
100T |
產(chǎn)品描述
細(xì)胞衰老（Cell senescence）是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制，一般含義是復(fù)制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細(xì)胞經(jīng)過(guò)有限次數(shù)的分裂后，停止分裂，此時(shí)細(xì)胞雖然是存活的，但是細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細(xì)胞研究常用的生物學(xué)特征包括：1）不可逆的生長(zhǎng)停滯；2）與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性，但是衰老細(xì)胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性，且隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。
本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學(xué)特征而設(shè)計(jì)的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍(lán)色產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察顏色變化以分析細(xì)胞的衰老狀況。
本試劑盒可以培養(yǎng)細(xì)胞的衰老檢測(cè)，也可以用于組織切片的衰老檢測(cè)。產(chǎn)品性能穩(wěn)定，參數(shù)經(jīng)優(yōu)化，著色敏感，特異性高。僅對(duì)衰老細(xì)胞進(jìn)行染色，不會(huì)染色衰老前的細(xì)胞（presenescent cells）、靜止期細(xì)胞（quiescent cells）、永生細(xì)胞（immortal cells）或腫瘤細(xì)胞。
產(chǎn)品組分
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組分編號(hào) |
組分名稱 |
規(guī)格 |
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40754-A |
β-半乳糖苷酶染色液A |
1.5 mL |
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40754-B |
β-半乳糖苷酶染色液B |
1.5 mL |
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40754-C |
β-半乳糖苷酶染色液C |
100 mL |
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40754-D |
β-半乳糖苷酶染色固定液 |
100 mL |
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40754-E |
X-Gal溶液 |
5 mL |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項(xiàng)
1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2、本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時(shí)請(qǐng)注意小心防護(hù)。
3、細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值，不能用于細(xì)胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。因?yàn)?/font>CO2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會(huì)影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
4、40754-B剛?cè)芙夂髸?huì)觀察到有沉淀，屬正?，F(xiàn)象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實(shí)驗(yàn)。配置染色工作液時(shí)，也可能有少量絮狀沉淀出現(xiàn)，震蕩混勻后就會(huì)完全溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于完全溶解狀態(tài)。
- X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細(xì)胞樣品可以在4ºC冰箱避光保存。
6、本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
1. 實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作：
1.1、染色工作液配制
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出，徹底溶解。其中X-Gal溶液最好置入冰槽里等待溶化。根據(jù)表1進(jìn)行染色工作液的配置，實(shí)驗(yàn)體系類型，檢測(cè)樣本數(shù)，統(tǒng)一配制單次實(shí)驗(yàn)需要的染色工作液總量。
表1 染色工作液配方表
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β-半乳糖苷酶染色液A |
10 μL |
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β-半乳糖苷酶染色液B |
10 μL |
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β-半乳糖苷酶染色液C |
940 μL |
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X-Gal溶液 |
40 μL |
【注】配制染色工作液時(shí)需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對(duì)于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會(huì)嚴(yán)重變形。但是染色過(guò)程可以在聚苯乙烯容器內(nèi)進(jìn)行，如細(xì)胞培養(yǎng)常用的6孔板。
【注】為減少樣本染色過(guò)程中出現(xiàn)結(jié)晶現(xiàn)象，建議X-Gal使用前可適當(dāng)37℃加熱1-3 h；染色工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，并盡量在15 min內(nèi)用完。
2. 6孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色（貼壁細(xì)胞）：
2.1、吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞1次，加入1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定10~15 min。
【注】對(duì)于其它類型的培養(yǎng)板，固定液及后續(xù)溶液的用量參照此比例進(jìn)行操作。
2.2、吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3 min。
2.3、吸除PBS/HBSS，每孔加入1 mL預(yù)熱的染色工作液，覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面。
2.4、37℃孵育過(guò)夜，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發(fā)。
【注】37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會(huì)影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
2.5、普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)：表達(dá)SA β-gal的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞，呈現(xiàn)藍(lán)色。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以去除染色工作液，加入2 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長(zhǎng)時(shí)間。
3. 懸浮細(xì)胞染色：
3.1、收集細(xì)胞，2500×g離心10 min收集細(xì)胞至1.5 mL離心管內(nèi)，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1 mLβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15 min。固定時(shí)可以在搖床上緩慢搖動(dòng)，以避免細(xì)胞結(jié)成團(tuán)塊。
3.2、2500×g離心10 min，吸除細(xì)胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細(xì)胞3次，每次3 min。
3.3、2500×g離心10 min，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1 mL預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見(jiàn)表1，具體染色工作液總量請(qǐng)根據(jù)樣本類型、樣本數(shù)等進(jìn)行計(jì)算。
3.4、37℃孵育過(guò)夜。
【注】37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會(huì)影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
3.5、取部分染色好的細(xì)胞，滴加到載玻片上或6孔板內(nèi)，普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，可以離心，去除染色工作液，加入1 mL PBS緩沖液，4℃可以保存數(shù)天。也可取細(xì)胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長(zhǎng)時(shí)間。
4. 冰凍切片染色：
4.1、冰凍切片先進(jìn)行復(fù)溫，用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。
4.2、加入適當(dāng)體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15 min。
4.3、用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5 min。
4.4、吸除PBS，加入適當(dāng)量的預(yù)熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見(jiàn)表1。
4.5、37℃孵育過(guò)夜，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發(fā)，最好把整個(gè)切片浸泡在染色工作液中。
【注】37℃孵育不能在CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行，因其內(nèi)高濃度的CO2會(huì)影響染色工作液的pH值，導(dǎo)致染色失敗。
4.6、普通光學(xué)顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。如不能及時(shí)觀察計(jì)數(shù)，加上封片劑封片后4℃可保存較長(zhǎng)時(shí)間。
HB240606
