在一些蛋白和質(zhì)粒DNA生產(chǎn)中使用大腸桿菌進(jìn)行重組表達(dá)是一種相對簡單且經(jīng)濟有效的方式。使用了大腸桿菌進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)的工藝過程中,很有可能會污染來自大腸桿菌的宿主細(xì)胞蛋白(HCPs),這種污染可能會降低治療藥物的療效,并導(dǎo)致不良的毒性或免疫反應(yīng),因此在用于人類或動物的治療類藥物的生產(chǎn)純化過程中,需要將該雜質(zhì)含量盡可能降到最低。
ELISA法是一種使用簡單、靈敏度高且客觀的HCPs檢測方法。本試劑盒應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)的實驗原理進(jìn)行E.coli HCP殘留量檢測,將E.coli HCP標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入預(yù)包被抗E.coli HCP抗體的酶標(biāo)板(36712-A),然后加入稀釋后的生物素標(biāo)記的E.coli HCP檢測抗體(36712-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36712-D),形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP 復(fù)合物,洗板后加入TMB顯色液(36712-G)顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液(36712-H)的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的E.coli HCP的量呈正相關(guān)。本試劑盒可以用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測。
產(chǎn)品信息
貨號 |
36712ES48 / 36712ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測范圍 |
3.125-200 ng/mL |
檢測方法 |
雙抗夾心法 |
檢測時長 |
4小時 |
靈敏度 |
2.22 ng/mL |
稀釋線性 |
80 - 120% |
回收率 |
75 - 125% |
板內(nèi)差 |
≤ 10% |
板間差 |
≤ 15% |
實驗數(shù)據(jù)
典型的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(以下標(biāo)準(zhǔn)曲線圖僅供參考,應(yīng)以同次實驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本含量):
圖2:實驗步驟流程簡圖
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