產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品描述
ER-Tracker探針是一系列具有細(xì)胞膜透過性，對活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細(xì)胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細(xì)胞染色后用醛固定，可以部分保留活細(xì)胞的染色特征。
本品為ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)，由綠色熒光染料BODIPY® FL和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成，其Ex= 504 nm，Em= 511nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一種常用降血糖藥物，在胰島β細(xì)胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細(xì)胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度結(jié)合ATP-敏感型K+通道的磺脲受體，且本受體富集存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，因此適合用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針。
本品為溶于DMSO的1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)儲存液，推薦工作濃度為～1μM。
產(chǎn)品性質(zhì)
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分子式（Formula） |
C37H42BClF2N6O6S |
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分子量（Molecular Weight） |
783.1 |
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外觀（Appearance） |
液體 |
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Ex/Em |
504/511nm |
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濾片（Filter） |
FITC |
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結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運輸和保存方法
冰袋運輸。≤-20℃避光干燥保存，至少六個月有效。避免反復(fù)凍融。
注意事項
1）避免反復(fù)凍融，可根據(jù)單次用量分裝保存。避免將本品儲存于無霜冰箱。
2）DMSO有毒，請小心操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4）本產(chǎn)品僅作科研用途！
使用方法
本實驗方案經(jīng)牛肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞優(yōu)化，且已被其他常規(guī)細(xì)胞系驗證。但不同的細(xì)胞類型其最佳使用條件不同，還需用戶根據(jù)該方案進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化。
1. 試劑準(zhǔn)備
使用前將ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)回溫至室溫，并簡短離心使該DMSO溶液至管底。
2. 細(xì)胞樣品處理及染色
2.1 將1mM ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)儲存液按照實驗要求稀釋至工作濃度，推薦工作濃度為～1µM。建議在不影響實驗結(jié)果的前提下盡量使用較低濃度探針，以避免由于濃度過高染色導(dǎo)致的假象。
注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg）稀釋該探針進(jìn)行染色，可得到最佳實驗結(jié)果。
2.2 染色
對于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液于37℃孵育細(xì)胞15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)液，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
細(xì)胞如需固定，請參考以下步驟。
3．細(xì)胞固定
3.1 固定細(xì)胞：用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞2min。
注：已染色細(xì)胞用醛固定后，僅部分ER-Tracker Green (BODIPY® FL Glibenclamide)留在細(xì)胞內(nèi)，熒光信號會有部分衰減。
3.2 清洗觀察細(xì)胞：細(xì)胞固定后，可用合適緩沖液進(jìn)行清洗，每次5min，共2次。清洗后可對細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)封片、鏡檢或進(jìn)一步染色。
注：不建議對細(xì)胞進(jìn)行透化處理，因為經(jīng)Triton X-100透化后，無信號保留。
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