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無機(jī)焦磷酸酶(Inorganic Pyrophosphatase,PPase)可催化一分子焦磷酸鹽轉(zhuǎn)化為兩分子磷酸鹽離子。在核酸擴(kuò)增實驗中,PPase可以水解隨著反應(yīng)生成的無機(jī)焦磷酸鹽,這是一個高放能的反應(yīng),可使反應(yīng)平衡向產(chǎn)物生成端移動,從而避免對反應(yīng)體系的抑制。
在mRNA疫苗制品的生產(chǎn)過程中,加入PPase可以提高mRNA的產(chǎn)量。但對于以mRNA為終產(chǎn)物的產(chǎn)品來說,加入的PPase屬于外源物質(zhì),需要在工藝純化過程中被去除,因此需要對PPase的殘留量進(jìn)行檢測以評估純化工藝對于蛋白殘留的去除效果以及確認(rèn)mRNA疫苗制品中的PPase殘留是否被純化至一定的可接受范圍。
本試劑盒應(yīng)用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)的實驗原理進(jìn)行PPase殘留量檢測,將PPase標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本加入預(yù)包被抗PPase抗體的酶標(biāo)板(36706-A),然后加入稀釋后的生物素標(biāo)記的檢測抗體(36706-C),最后加入Streptavidin-HRP(SA-HRP)(36706-D),形成抗體+抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP 復(fù)合物,洗板后加入TMB顯色液(36706-H)顯色。TMB在HRP酶的催化下由無色轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在終止液(36706-I)的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。黃色的深淺與樣本中被檢測到的PPase的量呈正相關(guān)。
產(chǎn)品信息
貨號 |
36706ES48 / 36706ES96 |
規(guī)格 |
48 T / 96 T |
檢測范圍 |
0-16 ng/mL |
檢測方法 |
雙抗夾心法 |
檢測時長 |
3.5小時 |
靈敏度 |
0.16 ng/mL |
回收率 |
75 - 125% |
板內(nèi)差 |
<10% |
板間差 |
<15% |
實驗數(shù)據(jù)
典型的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(以下標(biāo)準(zhǔn)曲線圖僅供參考,應(yīng)以同次實驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本含量):
圖2:實驗步驟流程簡圖
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