PCR-based Genotyping等實(shí)驗(yàn)，常需純化樣本基因組。當(dāng)待測(cè)樣本較多時(shí)，純化基因組的過(guò)程費(fèi)時(shí)、操作重復(fù)，并且實(shí)驗(yàn)成本高。翌圣生物通過(guò)改造Taq DNA聚合酶，優(yōu)化PCR反應(yīng)體系開(kāi)發(fā)出無(wú)需基因組純化的Direct PCR Kit系列產(chǎn)品。
Clever PCR：Direct PCR
翌圣Direct PCR Kit是直接從樣本開(kāi)始，以未經(jīng)基因組純化的微量原始樣本（圖1-A）或其裂解產(chǎn)物（圖1-B）作為模板，進(jìn)行PCR-based Genotyping（見(jiàn)圖1）。與常規(guī)PCR-based Genotyping相比，Direct PCR Kit樣本用量少，操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)成本低，可高通量化樣本檢測(cè)。
圖1. Direct PCR技術(shù)
A. 直接法：取少量樣本直接加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
B. 裂解法：樣本取樣后，加入裂解液中，裂解釋放基因組，取少量裂解上清液加入到PCR Master Mix中，進(jìn)行PCR鑒定。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
★ 直接：無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)而昂貴的DNA純化
★ 快速：10min完成模板制備，最少50min完成PCR反應(yīng)
★ 簡(jiǎn)便：樣品無(wú)需剪碎或研磨即可完成裂解;PCR Mix為預(yù)混液形式，減少加樣步驟
★ 節(jié)?。?/span>材料用量少
★ 高通量：可在96孔板中完成裂解反應(yīng)
翌圣生物Direct PCR Kit
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產(chǎn)品參數(shù) |
Animal Tissue Direct PCR Kit |
Mouse Tissue Direct PCR Kit |
Plant Tissue Direct PCR kit |
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適用生物 |
小鼠、兔子、鳥(niǎo)類、淡水魚(yú)、果蠅、線蟲(chóng)、狗 |
小鼠、大鼠 |
水稻、玉米、煙草、油菜、小麥、大豆等 |
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適用組織/材料類型 |
腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、羽毛末端 |
鼠尾、鼠耳、腳趾（帶肌肉）和其他臟器 |
嫩葉、老葉、幼苗、嫩莖 |
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樣品使用量 |
5-10mg |
組織：5-10mg，鼠尾：1-5mm |
葉片：1-10mm，種子：1-3mm |
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基因組釋放時(shí)間 |
5-30min |
15min |
0-10min |
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PCR產(chǎn)物最適長(zhǎng)度 |
＜1kb |
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PCR產(chǎn)物是否加A |
裂解反應(yīng)體系加A效率不定 |
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20µL體系，裂解產(chǎn)物使用量 |
1-4µL |
0.2-2µL |
0.2-1µL |
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應(yīng)用 |
轉(zhuǎn)基因鑒定、基因分型等 |
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Direct PCR Kit實(shí)驗(yàn)過(guò)程
本系列產(chǎn)品運(yùn)用獨(dú)特的蛋白酶裂解體系，裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的PCR Master Mix進(jìn)行基因擴(kuò)增。
圖2.動(dòng)物、小鼠組織直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程
圖3.植物組織直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
改造的Taq DNA Polymerase是Direct PCR的保證：超強(qiáng)的抑制物耐受性
對(duì)于非純化樣本作為模板時(shí)，會(huì)引入很多對(duì)PCR反應(yīng)有抑制的成分。以普通的PCR反應(yīng)體系和Taq DNA聚合酶較難得到理想的結(jié)果，甚至無(wú)法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。本系列試劑盒中PCR Mix為配方優(yōu)化預(yù)混液，采用改造的Taq DNA Polymerase，增加與模板DNA結(jié)合能力，對(duì)于常見(jiàn)PCR抑制劑具有更高的耐受性，因此具有更廣泛的模板適應(yīng)性。
圖4.直擴(kuò)PCR Kit中的PCR Mix具有更高的雜質(zhì)耐受度。
相同模板量，用不同的PCR Mix進(jìn)行PCR，同時(shí)在體系中加入不同濃度的各種PCR反應(yīng)抑制物。比較不同條件下的PCR產(chǎn)物量。
翌圣生物針對(duì)不同樣本，開(kāi)發(fā)出一系列產(chǎn)品
一、多動(dòng)物通用型：Animal Tissue Direct PCR Kit
★ 快速：操作時(shí)間短
圖5.翌圣動(dòng)物組織直擴(kuò)PCR試劑盒更加節(jié)省時(shí)間。
★ 實(shí)驗(yàn)例：基因敲除小鼠基因型鑒定
圖6.動(dòng)物組織直擴(kuò)PCR試劑盒檢測(cè)基因敲除動(dòng)物組織直擴(kuò)結(jié)果。
M：100bp DNA ladder。1-8：以裂解產(chǎn)物為模板。+：以50ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
單條帶（580bp）：敲除動(dòng)物純合子基因組。單條帶（180bp）：野生型基因組。兩條帶（580bp/180bp）：敲除動(dòng)物雜合子基因組。
二、嚙齒類專用型：Mouse Tissue Direct PCR Kit
★ 更快速：基因釋放充分
圖7.小鼠組織直擴(kuò)PCR試劑盒不同裂解時(shí)間直擴(kuò)結(jié)果。M：100bp DNA ladder。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
★ 更徹底：基因釋放充分
1、優(yōu)于常規(guī)堿裂解方法
圖8.鼠尾經(jīng)不同裂解方式處理后的直擴(kuò)結(jié)果。
檢測(cè)基因：SOX21。M：100 bp DNA ladder。1-2：以常規(guī)堿裂解方式處理裂解產(chǎn)物為模板。
3-4：以小鼠組織直擴(kuò)PCR試劑盒裂解產(chǎn)物為模板。+：以50 ng純化基因組DNA為模板。﹣：以去離子水為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
2、媲美同類產(chǎn)品
圖9.鼠尾經(jīng)不同品牌同類產(chǎn)品裂解處理后的直擴(kuò)結(jié)果。
檢測(cè)基因：SOX21。M ：100 bp DNA ladder。+ ：以50 ng純化基因組DNA為模板。循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)。
三、植物類專用型：Plant Tissue Direct PCR Kit
多類型植物樣本驗(yàn)證
圖10.不同類型植物葉片直擴(kuò)結(jié)果。
M：100 bp DNA ladder。C：相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2：葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù)：30個(gè)循環(huán)。
客戶案例
★ 小鼠基因型鑒定
圖11. 北京基石生命科技有限公司用戶使用鼠尾直擴(kuò)PCR試劑盒進(jìn)行小鼠基因型鑒定結(jié)果
★ 水稻基因直擴(kuò)
圖12. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)用戶使用植物直擴(kuò)PCR試劑盒擴(kuò)增水稻相關(guān)基因
訂購(gòu)信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
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Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye)動(dòng)物組織直擴(kuò)PCR試劑盒 |
10184ES50/70 |
50T/200 T |
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10185ES50/70 |
50T/200 T |
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10187ES50/70 |
50T/200 T |
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19698ES50/70 |
50T/200 T |
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10170ES50/70 |
50T/200 T |
