近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，基于核酸檢測(cè)的診斷方法已大量建立并廣泛應(yīng)用于人類疾病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中。與其他的核酸擴(kuò)增技術(shù)相比，等溫?cái)U(kuò)增有快速、高效、特異的優(yōu)點(diǎn)且無(wú)需專用的設(shè)備，所以它一經(jīng)出現(xiàn)就被許多學(xué)者認(rèn)為是一種有可能與PCR媲美的檢測(cè)方法。
因此，相信恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷儀器和試劑盒的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用將會(huì)是未來(lái)分子診斷POCT的一個(gè)新方向。
主流恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)原理介紹
1、LAMP環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
原理：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）使用具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶，針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，在等溫條件下高效、快速、特異性擴(kuò)增靶標(biāo)序列，可在60-65℃進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增，15-60分鐘左右即可實(shí)現(xiàn)109～1010倍的核酸擴(kuò)增。
優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用：等溫?cái)U(kuò)增因其反應(yīng)快速、特異高、設(shè)備簡(jiǎn)單易操作、結(jié)果易于鑒定等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)應(yīng)用于病原菌、寄生蟲(chóng)、病毒、疾病和轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)等領(lǐng)域，并且還將廣泛應(yīng)用于臨床傳染病診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域，已經(jīng)成為一種適用于分子POCT平臺(tái)的理想方法。
分類：LAMP檢測(cè)方法分為多種，包括比濁法、pH顯色法、熒光染料法（如NHB、鈣黃綠素、SYBR Green、Syto等）、熒光探針?lè)ǖ取?/font>
2、RPA重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)
原理：重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件，主要依賴于重組酶、Bsu酶和SSB蛋白?？梢栽?7~42 ℃條件下，10~30 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)待測(cè)靶標(biāo)的快速檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用：它具有反應(yīng)靈敏度高、特異性強(qiáng)、對(duì)儀器依賴程度低且可整合多種檢測(cè)模式等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于基層和現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)，可廣泛應(yīng)用于體外診斷、動(dòng)物疫病、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。
分類：RPA檢測(cè)方法分為多種，包括電泳法、EXO探針?lè)?、Fpg探針?lè)?、測(cè)流層析試紙條（LF-RPA）以及絮凝分析檢測(cè)等。
部分產(chǎn)品性能展示
01 pH顯色法RT-LAMP試劑
pH顯色法RT-LAMP是將可視染料作為敏感指示劑，在60-65℃等溫條件下，利用恒溫水浴鍋或普通PCR儀完成一步法RNA核酸擴(kuò)增。30min即可通過(guò)反應(yīng)后顏色的變化，判斷是否感染病原體，結(jié)果更直觀（陽(yáng)性為橙黃色，陰性為洋紅色）。該方法適用于大批量人群的快速檢測(cè)。
推薦產(chǎn)品：
RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）
RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（13920）（可凍干版）
性能展示：
02 熒光染料法RT-LAMP試劑
熒光染料法RT-LAMP是將熒光染料（如SYBR Green、Syto等）作為熒光標(biāo)記物，在擴(kuò)增反應(yīng)中與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光信號(hào)會(huì)增強(qiáng)800-1000倍。使用熒光定量PCR儀在60-65℃恒溫條件下進(jìn)行測(cè)試，約30min后即可通過(guò)擴(kuò)增結(jié)果判斷是否感染病原體，還可搭配微流控芯片或便攜式檢測(cè)儀快速檢測(cè)。
推薦產(chǎn)品：RT-LAMP Dye Assay Kit（UDGplus）（13762ES）
性能展示：
RT-LAMP/RPA mix選擇指南
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產(chǎn)品分類 |
RT-LAMP mix |
RPA mix |
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產(chǎn)品名稱 |
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產(chǎn)品貨號(hào) |
13762ES |
13906ES |
13920ES |
16702ES |
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產(chǎn)品類別 |
熒光染料法 |
pH顯色法 |
pH顯色法 |
探針?lè)?/font> |
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產(chǎn)品組份 |
2組份 Buffer、酶mix |
3組份 Buffer、RT酶、Bst酶 |
4組份 Buffer、RT酶、 Bst酶、凍干保護(hù)劑 |
4組份 Buffer、酶mix、 醋酸鎂 |
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支持凍干 |
否 |
支持，不含凍干保護(hù)劑 |
支持，含凍干保護(hù)劑 |
不支持 |
LAMP/RT-LAMP原酶選擇指南
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產(chǎn)品分類 |
Bst酶 |
逆轉(zhuǎn)錄酶 |
UDG酶 |
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產(chǎn)品名稱 |
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產(chǎn)品貨號(hào) |
14402ES |
14405ES |
11111ES |
11297ES |
14455ES |
14001ES |
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酶活濃度 |
40 U/μL |
60 U/μL |
200 U/μL |
600 U/μL |
1 U/μL |
1 U/μL |
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產(chǎn)品組份 |
3組份 Buffer、酶、硫酸鎂 |
2組份 Bst凍干粉、復(fù)溶液 |
2組份 Buffer、酶 |
單組份 |
單組份 |
單組份 |
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支持凍干 |
否 |
是 |
否 |
是 |
否 |
是 |
RPA原酶選擇指南
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產(chǎn)品分類 |
Bsu聚合酶 |
重組酶 |
重組蛋白 |
單鏈結(jié)合蛋白 |
肌酸激酶 |
核酸外切酶 |
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產(chǎn)品名稱 |
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產(chǎn)品貨號(hào) |
11078ES |
11079ES |
11080ES |
11081ES |
14502ES |
14525ES |
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酶活濃度 |
5 U/μL |
2 μg/μL |
2 μg/μL |
5 μg/μL |
2 μg/μL |
100 U/μL |
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產(chǎn)品組份 |
單組份 |
單組份 |
單組份 |
單組份 |
單組份 |
2組份 Buffer、酶 |
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支持凍干 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
否 |
