——核酸消除的“終極武器”
翌圣生物研發(fā)團(tuán)隊利用一流的基因工程改造技術(shù)，研制而成的核酸去除的“終極武器”—非限制性核酸內(nèi)切酶，既保證了產(chǎn)品的純度與酶活，又確保了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，目標(biāo)客戶攘括工業(yè)端與科研端兩大科學(xué)研究鏈，可滿足廣大生物研究者的基本需求。
翌圣核酸酶，嚴(yán)格把控，品質(zhì)優(yōu)先
1、質(zhì)檢項目
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貨號 |
表達(dá)宿主 |
活性 |
內(nèi)毒素去除 |
濃度 |
純度SDS-PAGE |
純度SEC-HPLC |
細(xì)菌檢測 |
蛋白酶檢測 |
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翌圣20125（工業(yè)） |
酵母菌 |
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翌圣20156（科研） |
大腸桿菌 |
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翌圣20157（工業(yè)） |
大腸桿菌 |
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2、質(zhì)檢結(jié)果
核酸內(nèi)切酶超強(qiáng)特性
特性一：耐受性強(qiáng)
能夠與多種細(xì)胞裂解液同時使用，如RIPA；與含有多種離子和非離子型去污劑、還原劑的蛋白提取試劑等兼容。
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試劑 |
耐受劑量 |
耐受程度 |
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鹽酸胍 |
>100 mM |
完全抑制Benzonase活性 |
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EDTA |
1 mM |
部分抑制Benzonase活性 |
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5 mM |
活性喪失90% |
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PMSF |
1 mM |
不會抑制Benzonase活性 |
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Triton® X-100 |
濃度<0.4% |
保持70%的活性 |
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濃度<0.4%<1% |
活性急劇降低 |
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濃度＞1% |
活性喪失70% |
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SDS |
濃度在0.1%~1% |
活性急劇降低 |
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尿素 |
>6 M |
活性急劇降低 |
特性二：核酸內(nèi)切酶操作簡易，輕松使用
1、推薦使用條件
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條件參數(shù) |
最佳條件 |
有效條件 |
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Mg2+ |
1-2 mM |
1-10 mM |
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pH |
8-9 |
6-10 |
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溫度 |
37℃ |
0-42℃ |
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DTT |
0-100 mM |
>0 mM |
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巰基乙醇 |
0-100 mM |
>0 mM |
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單價陽離子 |
0-20 mM |
0-150 mM |
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磷酸根離子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
2、推薦使用量
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實驗類型 |
蛋白電泳樣品 |
藥物生產(chǎn)-1g |
疫苗、病毒生產(chǎn)-1L |
細(xì)胞培養(yǎng)-1L |
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推薦產(chǎn)品 |
Nuclease（科研級，20156） |
Nuclease（無內(nèi)毒素級，20125，20157） |
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最低要求 |
125 U（0.5 µL） |
25 U/mL（1 µL） |
0.1 U/mL（0.4 µL） |
0.1 U/mL（0.4 µL） |
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建議用量 |
500 U（2 µL） |
250 U/mL（10 µL） |
25 U/mL（100 µL） |
5 U/mL（20 µL） |
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孵育時間 |
通常作用時間37℃在15~60 min；25℃在30~120 min； |
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注：以上僅僅是推薦，可根據(jù)實驗自主摸索最優(yōu)實驗條件。 |
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助陣四方，應(yīng)用甚廣
應(yīng)用1，除去生物制品中的DNA/RNA
核酸內(nèi)切酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工業(yè)生物制品中核酸的去除，使生物制品的最終核酸含量符合要求，同時提高生物制品功效。并且研究者還提供了一種可獲得HIV測序文庫的方案HIV-SMART，其中核酸內(nèi)切酶的運(yùn)用，可顯著提高HIV病毒測序覆蓋度，且不影響病毒核酸的回收率。
圖3 （+）添加和（-）不添加核酸內(nèi)切酶處理的CHU1756NGS覆蓋圖[1]
應(yīng)用2，用于降低細(xì)胞破碎后的粘度
核酸內(nèi)切酶可以降解所有形式的核酸，降低細(xì)胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分離效果，使之易于過濾（尤其是超濾），利于下游層析純化操作。
圖4 細(xì)胞裂解液Nuclease處理（A）和未處理（B）比較圖
應(yīng)用3，生化分析樣品的制備
在ELISA、色譜分析、雙相電泳和足跡分析等過程中，用核酸內(nèi)切酶處理含有核酸的蛋白樣品，可提高分辨率，并提高回收率。
圖5 小鼠腦核蛋白Nuclease處理（A）和未處理（B）雙向電泳比較圖[2]
應(yīng)用4，CAR-T治療相關(guān)行業(yè)（慢病毒包裝）
FAQ——如何擺脫后續(xù)核酸內(nèi)切酶干擾？
措施1：采用高于1mM EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制全能核酸酶活性，極端條件會造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃處理30 min等；
措施2：對于帶某種標(biāo)簽的Nuclease核酸內(nèi)切酶可通過相應(yīng)的標(biāo)簽蛋白純化樹脂直接去除，去除率>95%；
措施3：對于不帶標(biāo)簽的Nuclease核酸內(nèi)切酶，可通過色譜純化去除核酸內(nèi)切酶，然后可通過檢測殘留活性或ELISA檢測來判斷去除是否成功。
產(chǎn)品訂購信息
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產(chǎn)品 |
貨號 |
規(guī)格 |
價格（元） |
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20125ES25 |
25 KU |
1125.00 |
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20125ES50 |
50 KU |
1965.00 |
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20125ES60 |
100 KU |
3245.00 |
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20156ES25 |
25 KU |
418.00 |
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20156ES50 |
50 KU |
768.00 |
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20156ES60 |
100 KU |
1398.00 |
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20157ES25 |
25 KU |
1125.00 |
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20157ES50 |
50 KU |
1965.00 |
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20157ES60 |
100 KU |
3245.00 |
文獻(xiàn)引用
[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.
[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
HB201214
