免疫細(xì)胞（immune cell）俗稱白細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和各種吞噬細(xì)胞等，也特指能識別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的基本成分，在體內(nèi)分布很廣泛。除淋巴細(xì)胞外，參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞還有漿細(xì)胞、粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞及單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞。

免疫細(xì)胞分離方法：

1、根據(jù)細(xì)胞屬性（如粘附）和功能不同進(jìn)行細(xì)胞分離：粘附分離法、尼龍毛柱分離法、羰基鐵分離法等。

2、根據(jù)細(xì)胞的大小及比重的差異進(jìn)行細(xì)胞分離：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法和Percoll 不連續(xù)密度梯度離心法等。

3、利用細(xì)胞表面標(biāo)志進(jìn)行細(xì)胞分離：E 花環(huán)沉淀分離技術(shù)、免疫磁珠法分離、流式細(xì)胞術(shù)分離法、補(bǔ)體細(xì)胞毒分離法，洗淘分離法（panning）。

其中外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離和免疫磁珠分離細(xì)胞是最常見的免疫細(xì)胞分離方法。

外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

【原理】

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分離是免疫學(xué)研究中的一項(xiàng)基本技術(shù)。目前國內(nèi)外分離 PBMC 的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法。用此方法分離 PBMC 純度可達(dá)95％，淋巴細(xì)胞約占 90％，其中 T 淋巴細(xì)胞占 80％，B 淋巴細(xì)胞占 4～10％。下圖紅色方框內(nèi)即為PBMC。

【方法】

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)所用玻璃器皿應(yīng)該潔凈。如果制備的單個(gè)核細(xì)胞懸液用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，上述操作過程都要在無菌條件下進(jìn)行，所用器材、試劑都應(yīng)為無菌。

2、實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞得率與室溫及分層液比重等有關(guān)。分層液應(yīng)避光 4℃保存。

3、不同屬的PBMC所需的分離液都不同，在分離人 PBMC 時(shí)，要求其比重為 1.077；分離小鼠單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.080；分離大鼠單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.084～1.087；分離馬單個(gè)核細(xì)胞時(shí)比重為 1.090。

4、往淋巴細(xì)胞分層液中加入稀釋全血時(shí)，不得將血液沖入分離液中，須保持兩層液體的清晰界面。

免疫磁珠法分離淋巴細(xì)胞

【原理】

免疫磁珠法分離細(xì)胞是基于細(xì)胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結(jié)合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離。免疫磁珠法分離細(xì)胞可分為直接法和間接法。

【方法】

根據(jù)磁珠結(jié)合的細(xì)胞與所要獲得的細(xì)胞的關(guān)系，免疫磁珠法分離細(xì)胞可分為正選法和負(fù)選法。正選法即磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞，負(fù)選法即磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于上清液的細(xì)胞為所需細(xì)胞。還有一種基于負(fù)選法的高效分離方法，即在實(shí)驗(yàn)體系中加入連接有磁珠的多種單抗，通過磁性分離器后，則所有不需要的細(xì)胞被吸附在磁架上，未被吸附的細(xì)胞為目的細(xì)胞。這種方法可一次去除多種細(xì)胞，又稱雞尾酒法（cocktail）。

【特點(diǎn)】

1、純度高：所獲細(xì)胞純度達(dá)（93%-99%）。

2、得率大：獲率可達(dá)90%。

3、對細(xì)胞活影響?。夯罴?xì)胞率大于95%。

4、操作簡單：不需使用離心沉淀分離技術(shù)。

5、省時(shí)且費(fèi)用低：不需要昂貴儀器。

【測試結(jié)果】

圖1 山羊抗小鼠IgG免疫磁珠分選CD4+淋巴細(xì)胞流式檢測圖

產(chǎn)品信息