翌圣生物Hieff UNICON?系列染料法熒光定量試劑助力打造優(yōu)美曲線
——《Nature》《Cell》《Science》作者的共同選擇
熒光定量PCR是一類高靈敏的實(shí)驗(yàn)，要求實(shí)驗(yàn)人員操作高度精細(xì)化。因此，在進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們總是不可避免的會(huì)遇到問(wèn)題：
一、 非實(shí)驗(yàn)因素的相關(guān)問(wèn)題
• 實(shí)驗(yàn)室qPCR實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目多，儀器被占用，辛苦配制后的反應(yīng)體系不知如何處置
• 定量樣品多，加樣任務(wù)繁重，眼花目眩擔(dān)心加樣錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可信
• 上機(jī)時(shí)間長(zhǎng)，上機(jī)實(shí)驗(yàn)次數(shù)受限，實(shí)驗(yàn)任務(wù)不能按計(jì)劃定期完成
• 實(shí)驗(yàn)室儀器更換新儀器，實(shí)驗(yàn)室定量?jī)x器多，定量試劑與儀器不匹配
二、 受實(shí)驗(yàn)因素限制的問(wèn)題
• 低豐度基因定量問(wèn)題
• 復(fù)雜的引物設(shè)計(jì)與篩選過(guò)程、靈敏度、復(fù)孔重復(fù)性……
翌圣生物作為研發(fā)qPCR試劑的資深廠家，匠心研發(fā)了一款高性能qPCR預(yù)混液——Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix，可以一次性解決上述實(shí)驗(yàn)煩惱。其中Universal ROX替代了傳統(tǒng)ROX，彌補(bǔ)不同儀器平臺(tái)的光程差，實(shí)現(xiàn)了適合所有qPCR儀器。另外，產(chǎn)品采用抗體法修飾，同時(shí)配方添加了基因擴(kuò)增的促進(jìn)因子，產(chǎn)品的擴(kuò)增性能大大提升，完美兼容了科研端老師對(duì)高性能的需求與工業(yè)端企業(yè)高效率的要求。
產(chǎn)品特點(diǎn)
全儀器平臺(tái)通用：預(yù)混特定類型參比染料，無(wú)需調(diào)整ROX濃度
易于示蹤：藍(lán)色預(yù)混液，觀察顏色可直接區(qū)分是否加樣
強(qiáng)穩(wěn)定性：室溫配制體系，配制后的體系可4℃放置24 h，檢測(cè)結(jié)果無(wú)變化
上機(jī)快速：兼容常規(guī)程序與快速程序，最快46 min完成定量實(shí)驗(yàn)
擴(kuò)增性能好：擴(kuò)增效率高，特異性好，可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)基因
產(chǎn)品性能
1、 全平臺(tái)通用：適用于所有qPCR機(jī)型
圖1. Hieff UNICON® Universal Blue 預(yù)混液可實(shí)現(xiàn)全平臺(tái)通用。針對(duì)不同儀器平臺(tái)，與T品牌對(duì)比，Hieff UNICON® Universal Blue 預(yù)混液Ct值起峰更加靠前。以2 µL的質(zhì)粒10倍梯度稀釋液為模板，擴(kuò)增IL23R基因。
2、靈敏度高：可檢測(cè)至單拷貝
圖2. Hieff UNICON® Universal Blue 預(yù)混液可有效檢測(cè)7個(gè)數(shù)量級(jí)范圍的模板量，擴(kuò)增效率高，可在寬廣的線性范圍內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。以2 µL的106-100拷貝的質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增人IL23R基因。
3、檢出率和特異性良好：廣泛適用于30-70%GC含量的擴(kuò)增子
圖3. Hieff UNICON® Universal Blue預(yù)混液廣泛適用于30-70%GC含量的擴(kuò)增子，保證了極高的特異性檢出率。以2 µL的293T cDNA為模板，利用Primer5軟件設(shè)計(jì)1000對(duì)長(zhǎng)度為200 bp擴(kuò)增子（GC%含量30%-70%）的引物，隨機(jī)擴(kuò)增其中的27個(gè)擴(kuò)增子。
4、分辨率高：可精準(zhǔn)分辨2倍模板濃度差異
圖4. Hieff UNICON® Universal Blue 預(yù)混液可精準(zhǔn)區(qū)分2倍模板濃度差異。以2 µL的293T cDNA原液的2倍梯度稀釋液為模板，擴(kuò)增GAPDH基因。
5、復(fù)孔重復(fù)性好：90個(gè)復(fù)孔
圖5. Hieff UNICON® Universal Blue預(yù)混液具備良好的重復(fù)性，90個(gè)復(fù)孔的擴(kuò)增曲線高度重合，Ct值標(biāo)準(zhǔn)偏差<0.2。以1 µL的293T cDNA為模板，擴(kuò)增GAPDH基因。
6、良好的穩(wěn)定性：預(yù)混液反復(fù)凍融50次不影響擴(kuò)增性能
圖6. Hieff UNICON® Universal Blue預(yù)混液反復(fù)凍融50次，擴(kuò)增性能無(wú)變化。以1 µL的293T cDNA為模板，使用不同凍融次數(shù)的預(yù)混液，擴(kuò)增C2orf68基因。
客戶反饋
復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)產(chǎn)科醫(yī)院
樣本來(lái)源：小鼠卵巢癌細(xì)胞系ID8,HM1
浙江大學(xué)
樣本來(lái)源：小鼠附睪脂肪RNA
中科院植生所
樣本來(lái)源：擬南芥葉片RNA
翌圣qPCR Mix部分發(fā)表高分文獻(xiàn)
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| 高靈敏通用型定量預(yù)混液 | Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix | |
| 高特異高熒光定量預(yù)混液 |
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix |
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