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      Hieff Trans?Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL)

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      產(chǎn)品說明書

      FAQ

      COA

      已發(fā)表文獻

      產(chǎn)品描述

       

      Polybrene(聚凝胺,hexadimethrine bromide)是一種多聚陽離子聚合物,常用于哺乳動物細胞的DNA轉(zhuǎn)染實驗以增強脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑(肝素拮抗劑),常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序,因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。

      本產(chǎn)品以溶液形式提供,粉末用0.9% NaCl配制成10 mg/mL的溶液,并用0.22 μM濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1:2000稀釋,依細胞種類不同稀釋比例不同,具體查閱相關(guān)文獻。

       

      運輸與保存方法

       

      冰袋(wet ice)運輸。-20 ºC可保存2年,建議分裝保存,避免反復(fù)凍融。

       

      注意事項

       

      1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

      2)本產(chǎn)品僅作科研用途!

       

      操作步驟(僅供參考,具體使用濃度請參考相關(guān)文獻)

      【注】:Polybrene對某些細胞(如末端分化的神經(jīng)元,DC細胞)毒性較大,初次應(yīng)用建議先做毒性測試。

       

      實驗1:逆轉(zhuǎn)錄病毒感染(Retroviral Infection)

      1)重組逆轉(zhuǎn)錄病毒原液的制備:取5 mL生長培養(yǎng)基(5%血清)加入含單層轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄包裝細胞的100 mm培養(yǎng)盤內(nèi)。孵育24 h后,吸去培養(yǎng)液并用0.45 μm濾器過濾。

      2)待感染細胞的培養(yǎng):100 mm培養(yǎng)盤內(nèi)加入10 mL完全培養(yǎng)基,細胞密度為5×105/盤。

      3)病毒感染:細胞培養(yǎng)24 h后,吸去完全培養(yǎng)液。用含polybrene的2 mL病毒上清 (或?qū)⒉《驹合♂尩? mL)感染細胞,polybrene的終濃度為5-10 μg/mL。37°C孵育3-6 h。

      4)收集病毒顆粒:加入8 mL完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)2-3天后,收集培養(yǎng)基上清,處理得到病毒顆粒。

       

      實驗2:轉(zhuǎn)染

      1)完全生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,培養(yǎng)細胞密度約50%;

      2)孵育細胞18-24 h后準備DNA-培養(yǎng)基- Polybrene混合液,按如下操作制備混合液:①添加完全培養(yǎng)基(60 mm培養(yǎng)皿2 mL,100 mm培養(yǎng)皿3 mL),37°C預(yù)熱;②添加10 ng~10 µg質(zhì)粒輕輕混勻;③加入Polybrene至終濃度為5-10 μg/mL。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。

      3)去除培養(yǎng)基,在細胞中加入DNA-培養(yǎng)基-Polybrene溶液,在37°C孵育細胞6-20 h。細胞培養(yǎng)的前6 h內(nèi)約每1.5 h輕柔混勻。

       

      Ver.CN20240805

       

       

      400-6111-883